生物制药技术之发酵控制.ppt

发酵生产的过程及控制 How are microorganisms cultivated? Petri Disks Shake Flasks Fermentor 方法：一般都是由保存于冷冻管及砂土管或冰箱中的斜面菌种开始，在正式使用前要先转接到新鲜斜面培养基上活化后，再用于种子扩大培养。 二 种子扩大培养 将处于休眠状态的生产菌种，接入试管斜面活化后，再经过茄子瓶或摇瓶或种子罐逐级扩大培养获得一定数量和质量的纯种 作为种子应具备的条件 1、菌种细胞的生长活力强，转种至发酵罐后能迅速生长，延迟期短。 2、生理状态稳定。 3、菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的要求。 4、无杂菌污染，保证纯种培养。 5、保持稳定的生产能力。 影响种子质量的因素： 1、原材料的质量:如微量元素Mg、Ca、Ba能刺激孢子的生长。 2、培养温度：过低？过高？ 3、湿度：湿度低，孢子生长快；湿度大，孢子生长慢。 4、通气量： 5、斜面冷藏时间： 种子质量的控制措施 菌种稳定性检查：测定生产能力，防止生产能力的下降。 适宜的生长环境： 种子无杂菌的检查： 种子液生化分析项目：培养基质的消耗速度、pH的变化、溶氧利用、色泽和气味 接种龄和接种量 1、种龄：种子的培养时间 接种龄（seed age):指种子罐中培养的菌丝转入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。 以进入对数 生长期的菌体进入发酵罐。 思考：过老？过轻？ 2、接种量（seed volume):移入的种子液体积和接种后培养液体积的比例。接种量的大小取决于生产菌种在发酵罐中的繁殖速度。 大多数抗生素发酵的最适接种量为7-15%，有时可增加至20-50%。 思考： 接种量过大产生的后果？ 接种量过小产生的后果？ 液体培养之四——半连续培养 思考问题 １．发酵过程引起pH下降的因素？ 培养基中C、N比例不当，C源过多，或中间补糖过多，溶氧不足；消泡油加得过多；生理酸性物质存在 ２．发酵过程引起pH上升的因素？ 培养基中C、N比例不当，N源过多，氨氮释放；生理碱性物质存在；中间补料氨水或尿素等碱性物质加入过多 另外通气条件的变化，菌体自溶或杂菌污染都有可能引起发酵pH的变化。 最适pH的选择 原则: 有利于菌体的生长和产物的合成 选择方法： 控制方法： （1）在设计基础培养基时考虑维持pH的需要。 生理酸性或生理碱性物质的配比使用。 缓冲剂的使用。 （2）通过中间补料控制pH 按需补糖和恒速补糖的影响？ 溶氧高一般有利于菌体的生长和产物合成，但溶氧太大有时反而抑制产物的形成。 需考查每一种发酵产物的临界氧浓度和最适氧浓度。 最适溶氧浓度的大小与菌体和产物合成代谢的特性有关。 思考问题？ 发酵过程中引起溶解氧异常下降的原因？ 发酵过程中引起溶解氧异常升高的原因？ 提高溶氧的办法？ 5、CO2对发酵的影响 对微生物生长和发酵的影响： CO2对菌体生长有直接的影响； 对发酵的影响，影响产物的形成。 机制： （1） CO2和HCO3-影响细胞膜的结构：溶解于培养基中的CO2作用于细胞膜的脂质核心部位，而HCO3-影响膜蛋白。 （2） CO2可使发酵液pH下降，或与其它物质及生长必需的金属离子发生化学反应而形成沉淀，或造成氧的过量消耗而使溶解氧下降。 (3) 其它机制影响发酵：如影响甲基丙二酸前体的合成进而影响红霉素的合成 CO2浓度的控制 菌体的呼吸强度； 发酵液流变学特性； 通气搅拌程度； 外界压力； 与补料控制有密切关系？ 6、泡沫对发酵的影响及其控制： 思考泡沫产生的原因？ 搅拌和通气 发酵性泡沫：微生物细胞生长代谢和呼吸排出的气体，如氨气、二氧化碳等 培养基的理化性质，浓度，温度，酸碱度 思考泡沫对发酵的影响？ 逃液 发酵罐装料系数减少 易染菌 菌体量减少 代谢异常，菌体提前自溶 泡沫的消除和防治 机械消沫：方法？ 消沫剂消沫：好的消沫剂应具有降低液膜的机械强度和降低表面黏度两种作用，应具有较小的表面张力，较小的溶解度。常用： 天然油脂类、 聚醚类：聚氧丙烯甘油（GP）和聚氧乙烯氧丙烯甘油（GPE），二者一定比例配成的消沫剂为泡敌，用量为0.03%-0.035%. 高级醇类、 硅酮类等 发酵终点的确定 发酵中判断放罐的主要指标： 产物浓度、过滤速度、氨基氮、菌丝形态、pH、发酵液的外观和黏度。 综合：生产力高而成本低的时间作为放罐时间。 现代发酵工程 对工艺控制的需要 规模生产 GMP规范对过程文档化的要求 必要的检测手段 准确的执行成熟的工艺控制策略 实验室研究  完善的检测手段 全能性的过程控制软件 2、pH对发酵的影响 引起细胞膜电荷的变化（膜通透性改变）； 影响营养物离子化程度，从而影响营养物质的吸收； 影响生物活