生物实验二 海胆卵的结构.pptVIP

一、目的要求 掌握海胆卵的特性； 熟悉海胆早期卵裂球的发育潜能； 加深对海胆早期发育的双梯度模式的理解 二、实验材料 虾夷马粪海胆 Strongylocentrotus intermedius 原 肠 外 凸 建议实验顺序 part 1 ① 获得配子→…… → 去膜后镜检，培养 part 2 ① 实验用胚胎→….→ 含LiCl海水中培养； part3 未受精卵 → …. → 镜下观察、拍照； part1 ② 卵裂开始，无钙海水分离分裂球→…→ 镜检、培养； part2 ② 过滤海水中培养，定期观察拍照 * 实验二 海胆卵的结构 三、实验内容 从一个分离的分裂 球发育成完整的胚胎 三、人工单性生殖 人 工 单 性 受 精 （一）、从一个分离的分裂球发育成完整的胚胎 按照实验一的方法获得两性配子 人 工 授 精 50 ml试管，底部一层卵子+3滴精子悬液；计时 去 除 受 精 膜 振摇处理的时间和力度；受精后1min，振摇2-3min 镜 检 待受精卵下沉后，吸去上层海水，添加过滤海水继续培养 过滤海水中培养 ① 静置试管，并镜检受精膜去除情况 拍照去膜前后受精卵 （一）、从一个分离的分裂球发育成完整的胚胎 无钙人工海水分离卵裂细胞 待卵裂开始，吸去上层海水，添加无钙人工海水，移至小烧杯培养 培 养 和 观 察 无钙海水处理时间（第一次卵裂刚刚完成）、吹打方法 镜检、拍照卵裂球分离情况 分离后，吸去无钙人工海水，添加过滤海水，移至结晶皿培养 ② 拍照：比较、记录正常胚胎或幼虫与分 离卵裂球发育的胚胎或幼虫的大小 思考：无钙海水的作用原理 卵裂期胚胎和 未孵化囊胚 按照实验一方法获得 ① LiCl 海水中培养 将不同发育时期的胚胎，加入不同LiCl浓度（0、15和30 mmol/L）的海水中 ② 过滤海水中培养 待发育至孵化囊胚后，筛绢过滤去除LiCl海水，过滤海水冲洗，并于过滤海水中继续培养 观察记录（拍照）原肠外凸现象并与正常胚胎比较期发育速度 （二）、原肠外凸 未受精卵 高渗人工海水中处理 镜下观察，是否有受精膜举起和卵裂发生 将未受精卵移入盛有不同浓度（1.5倍、2倍、4倍）海水的手术皿中，处理5 min，倒掉高渗水，用过滤海水洗卵3次 （三）、人工单性生殖 受精膜举起 电子版上交如下照片（注意对比拍照）：去膜受精卵、分离分裂球主要发育阶段（卵裂、囊胚、原肠胚、幼虫）、原肠外凸、高渗海水引起受精膜举起； 绘制原肠外凸结构图，比较LiCl处理组与对照组的发育速度 比较不同浓度高渗海水引起受精膜举起的时间和数量的差异 思考：1）无钙海水分离卵裂球的作用原理； 2）人工单性生殖的局限 四、 作 业 分类地位：属棘皮动物门，海胆经纲，正形目，球海胆科。 特征：虾夷马粪海胆栖息于沙砾、岩礁地带的50m浅水域，水深5～20m处分布较多。海胆对饵料藻类选择性不强，壳径8mm以下稚海胆主食底栖硅藻及有机碎屑，后期改食大型藻类。虾夷马粪海胆生长快速，最大个体壳径可达10cm以上。性成熟为2龄，雌雄异体。繁殖主要在秋季，由于其性腺发育不同步，有些地区从春季至秋季断断续续产卵。我国北方地区自然繁殖季节9～11月，海区水温23～12℃；繁殖盛期10月中旬，水温17～18℃。性腺指数10～25％，壳径6cm左右的虾夷马粪海胆平均产卵量500粒左右，约5g。生殖：海胆是生长在潮间带或浅海的常见棘皮动物，它多栖息于岩石下礁缝中，幼海胆生长在水深2~3m处，长大后逐渐向深水处移居。虾夷马粪海胆1年种有2个繁殖季节，春季5～6月份，秋季9～11月份，适宜繁殖水温10～20℃。我国北方的育苗生产单位多在9～11月份利用育苗设施的相对空闲时间进行人工育苗。 分布：虾夷马粪海胆原产于日本北海道及以北沿海，在俄罗斯萨哈林岛等地也有分布。经多年的生态调查，认为它适于我国北方沿海特别是辽东和山东半岛养殖。1989年大连水产学院养殖系于由日本引进，经7年研究，已经掌握乐室内人工育苗和海上养成商品胆技术。 经济价值：可鲜食，也可加工成海胆酱等食物。味道鲜美，营养丰富，生殖腺含有较高的氨基酸、多糖及高度不饱和脂肪酸，有较高的食用和药用价值。 人工授精：50 ml试管，底部铺一层卵子→加3滴精子稀释液，立即倒转试管1次，混合精卵→加入精子后开始计时，并立即镜检受精膜举起； 去除受精膜：准确地在1 min后检查受精膜举起情况，用力持续振摇试管2-3 min（示范）→