第10讲以修复作用为中心的DNA的安全保障体系.pptVIP

第四章 以修复作用为中心的DNA的安全保障体系 导致DNA不稳定的因素 1，偶然的复制错误 2，环境紫外线、电离辐射化学物质（突变剂）造成的核酸分子损伤 3，外源遗传物质的侵入 保证DNA稳定性的机制 1，复制修复系统 2，损伤修复系统 3，限制-修复系统 第一节 复制修复 一、尿嘧啶糖基酶系统 （一）DNA中尿嘧啶的产生 （二）尿嘧啶糖基酶系统的组成 （三）修复过程 二、错配修复系统（mismatch repair system） （一）错配修复系统的组成 （二）错配修复的过程 1，错配矫正酶与未甲基化的GATC及同一条链上的错配碱基结合 2，错配矫正酶在两者之间切除一段包括错配碱基的DNA单链 3，DNA聚合酶III进行缺口充填 4，DNA连接酶连接切刻 （三）错配修复系统其他作用 1，去除渗入DNA的碱基类似物 2，在基因转换中起重要作用 第二节 损伤修复 致损伤因素 DNA分子损伤的类型 一、胸腺嘧啶二聚体的产生及其后果 二、胸腺嘧啶二聚体修复的生物学指征 （一）细菌的活存曲线 （二）修复类型 1，光复活（photoreactivation） 2，暗修复 除了可作用于胸腺嘧啶二聚体外，还可以修复其他类型的损伤，包括： （1）切除修复 （2）重组修复 （3）SOS修复 （4）二聚体糖基酶修复 三、胸腺嘧啶二聚体修复的分子生物学机制 (一）光复活（photoreactivation） 1，光复活的定义 2，光复活的过 （二）切除修复 1，切除修复一般过程 2，大肠杆菌的切除修复 （1）修复过程 （2）大肠杆菌切除修复的类型 短补丁修复（short-patch repair） 长补丁修复（long-patch repair） 3，真核生物的切除修复 （三）重组修复 1，除Uvr系统之外，还存在其他的暗修复系统 2，重组修复（复制后修复）的机制 （1）重组修复的姐妹链交换假说（图4-10） （2）重组修复所涉及的基因 （四）SOS修复 1,SOS反应 2,SOS修复的概念 3,SOS修复的结果 4,RecA蛋白在SOS修复中的作用 (1)RecA蛋白的主要生化活性 (2) RecA蛋白的作用 5,LexA蛋白在在SOS修复中的作用 (1)LexA蛋白的作用 是一种阻遏蛋白,结合于SOS系统中各基因的操作子上,使得这些基因不能产生转录产物 对自身基因的表达也有负向控制作用,但正常细胞中其表达量足以阻遏所有SOS基因的表达 当细胞DNA复制受阻时，LexA蛋白被RecA蛋白触发，发生自身催化的水解作用，SOS系统被激活，lexA基因表达也增加 DNA复制正常后,RecA蛋白失活,LexA蛋白恢复对SOS系统的阻遏作用 (2)由LexA控制的SOS基因构成一个调控元 LexA控制17个基因,统称din(damage inducible genes)基因,或SOS基因 SOS框：所有SOS基因的操作子都含有20bp的LexA结合位点,称为SOS框(SOS box) （五）嘧啶二聚体糖基酶修复系统 与非标准碱基的修复机制相同 四、其他损伤类型及其修复 （一）非标准碱基的修复 1，非标准碱基及其相应的DNA糖基酶 非标准碱基包括：尿嘧啶、次黄嘌呤、3-甲基腺嘌呤等 第一类DNA糖基酶无内在AP内切酶活性 第二类DNA糖基酶有内在AP内切酶活性 2， DNA糖基酶的修复机制 与尿嘧啶糖基酶的修复机制相同 第一类去除非标准碱基后，还可以通过DNA碱基插入酶进行修复 （二）碱基的丢失 1，去嘌呤作用（depurination）：嘌呤碱基自发水解导致 2，无碱基内切酶的作用 修复去嘌呤作用造成的损伤，也负责修复DNA中的尿嘧啶和次黄嘌呤 特异切断无碱基核糖的5’-磷酸的3’-酯键 3，碱基插入酶 目前只发现一种嘌呤碱基插入酶 专一性在AP位点插入互补的嘌呤碱基 嘌呤碱基的供体可以是自由碱基或嘌呤脱氧核苷。大肠杆菌的酶可以利用dATP和dGTP （三）烷基化损伤的修复 1，烷基化的主要位点 嘌呤碱基的N-7、N-3位、O-6位以及磷酸骨架 2，Ada蛋白在烷基化损伤的修复中的作用 （1）ada基因产物 Ada蛋白（O6-甲基鸟嘌呤甲基转移酶，MGMT）有354个Aa，39KDa （2）Ada蛋白的自杀行为 Ada蛋白可去除鸟嘌呤O6甲基，及甲基磷酸三酯上的甲基。两种甲基分别不可逆地结合于该酶的Cys321和Cys69上。去除一个甲基要消耗一个酶分子。 3，E.coli对烷基化的适应性反应 （1） Ada蛋白的作用 携带了甲基的Ada蛋白成为自身基因和其他三个基因（alkA，alkB，aidB）的诱导物，结合于基因RNA聚合酶结合位点的上游。其结合位点的一致序列为：AAANNAAAGCGCA （2）alkA基因的作用 编码烷基化DNA糖基酶，该酶