[医学]5色谱法-气相色谱法.ppt

气相色谱仪的基本结构 增加选择因子： 1.改变柱温 2.改变固定相使各组分的分配系数有较大差别 3.改用不同的流动相或流动相组成 40o C 65o C 10 0 5 Time in Minutes A B A B ZORBAX 300SB-CN ZORBAX 300SB-C18 mAU 保留时间 (min.) 80% 乙腈 20% 水 2 4 6 8 10 增加柱效： 1.增加柱长可改进分离度，但延长了分析时间 2.降低板高： 制备一根性能优良的柱子，并在最优化条件下进行 4.6 x 15 mm 4.6 x 30 mm 4.6 x 50 mm 4.6 x 75 mm 4.6 x 150 mm Absorbance SB-C18 1 2 3 4 5 6 7 分离度与柱长： 第十五章思考题 1.色谱法具有同时能进行 和 的特点而区别于其它方法，特别对 和 的分离，色谱法的优势更为明显。 2.按固定相外形不同色谱法是如何分类的？ 3.什么是气相色谱法和液相色谱法？ 4.保留时间、死时间及调整保留时间的关系是怎样的？ 5.从色谱流出曲线可以得到哪些信息？ 6.分配系数在色谱分析中的意义是什么？什么是选择因子？它表征的意义是什么？ 7.什么是分配比（即容量因子）？它表征的意义是什么？ 8. 是衡量柱效的指标，色谱柱的柱效 随 的增加而增加，随 的增大而减小。 9.板高、柱效及柱长三者的关系（公式）？ 10.利用色谱图如何计算理论塔板数和有效理论塔板数（公式）？ 11.同一色谱柱对不同物质的柱效能是否一样 12.塔板理论对色谱理论的主要贡献是怎样的？ 13.速率理论的简式, 影响板高的是哪些因素? 14. 可作为色谱柱的总分离效能指标. 15.如何根据分离度分析色谱分离的情况? 本章作业：316页1、3、4、6、19 第十六章 气相色谱法 Chapter 16 Gas Chromatography ( GC) 分类：气-固色谱和气-液色谱 定义：采用气体作为流动相的一种色谱法。 填充柱色谱和毛细管气相色谱法 吸附色谱和分配色谱 第十六章 气相色谱法 Chapter 16 Gas Chromatography ( GC) 特点：高分离效能、高选择性、高灵敏度、快速。 适用范围：沸点在500℃以下，热稳定 性好，分子量在400以下的物质，原则上都可采用气相色谱法 气相色谱仪及参数设置 气相色谱仪及参数设置 气相色谱仪的五大系统 检测系统 载气系统 分离系统 进样系统 温控和数据处理系统 气相色谱仪及参数设置 钢瓶He,N2 载气控制 数据处理 进样口 色谱柱 检测器 温度控制区 气相色谱主机 气相色谱仪及参数设置 作用： 常用载气： 要求： 一、载气系统 推动组分在柱中运行的动力; 氢气、氮气、氦气、氩气。 化学稳定性好；纯度高（毛细管柱达99.999%）；价格便宜并易取得；能适合于所用的检测器。 气相色谱仪及参数设置 N2变化最大, 可得到最低的HETP。 H2 和 He 曲线较平坦，即使较高的流速下也能得到较低的HETP,所以即使在较高的分析速度时，也可以得到较好的分离度. 参数设置： 1.载气选择： 2.载气流速： 塔板高度最小时对应最佳流速。 实际流速通常稍大于最佳流速，以缩短分析时间。 载气流速较小时选择氮气， 载气流速较大时选择氢气或氦气， 同时考虑对检测器的适应性。 气相色谱仪及参数设置 作用： 要求： 二、进样系统 将样品瞬间气化为蒸汽并引入色谱柱; 1.进样量（毛细管柱一般允许进样量 为10-3～ 10-2uL) 2.进样时间小于1s 3.精度和重现性 气相色谱仪及参数设置 参数设置： 1.进样口温度： 2.进样量： 3.进样方式： 二、进样系统 气相色谱仪及参数设置 比样品中最高沸点的温度至少高20?C 1μL或更少 分流进样或不分流进样 气相色谱柱 固定液要求 对试样各组分有适当的溶解能力,选择 性好; 挥发性小，热稳定性好; 化学稳定性好。 三、分离系统 烃类 硅氧烷类 醇类和醚类 酯类和聚酯 腈和腈醚等 固定液的分类 弱极性 弱极性到强极性 强极性 中强极性 强极性 三、分离系统 甲基聚硅氧烷类固定相结构 三、分离系统 按化学结构分类 硅氧烷类是目前应用最广泛的通用型固定液，使用温度范围宽(50～350℃)，硅氧烷类经不同的基团修饰可得到不同极性的固定相。 2、固定液的分类 三、分离系统 聚乙二醇类固定相结构 温度稳定性比聚硅氧烷类差； 最高使用温度低于聚硅氧烷类固定液。 三、分离系统 固定相组成 JW SGE 极性 100% 甲基硅氧烷 DB-1