采用二阶导数吸收光谱法比较创新药和生物仿制药单克隆-Agilent.PDFVIP

采用二阶导数吸收光谱法比较创新 药和生物仿制药单克隆抗体对的构 象研究 应用简报 生物仿制药 作者 前言 1 Devansh Shah 单克隆抗体 (mAb) 因其对人类健康的治疗价值而得到了大量关注。生物仿制药 韦洛尔科技大学，印度 是特定疾病创新药物 mAb 的复制品，由于创新药物的专利到期，这类仿制药物 2 3 迅速扩大了市场。一些用于研究蛋白质构象稳定性 以及证明创新药物和生物仿 Neethu Ayyolath 4 制药之间相似性的方法包括紫外光谱、圆二色性光谱和荧光光谱。本应用简报 甘露大学，印度奎隆 采用 Agilent Cary 60 紫外-可见分光光度计对一种创新药物（利妥昔单抗）及其生 Ursula Tems 物仿制药进行了分析。随后利用专用的 WinUV 软件对数据进行了解析，并采用 安捷伦科技公司，澳大利亚 二阶导数吸收光谱进行了详细的比较。结果不仅突出了 Cary 60 作为此应用分析 解决方案的固有功能，还证明了收集的数据如何提供蛋白质球状结构中芳香族 Ravindra Gudihal 氨基酸的微环境信息，从而证明了 mAb 在不同测试条件下的稳定性。 安捷伦科技公司（印度） 印度班加罗尔 紫外-可见光谱的优势 材料与方法 结果与讨论 紫外- 可见光谱是一种成熟可靠的技 L-苯丙氨酸、L-色氨酸和 L-酪氨酸来自 二阶导数吸收光谱有助于分析色氨 术，能够深入了解蛋白质的总体结 安捷伦科技公司。利妥昔单抗创新药 酸、酪氨酸和苯丙氨酸残基（分别为 构。它应用广泛，不需要昂贵的试剂 物和生物仿制药购自当地一家药店。 W 、Y 和 F ）的微环境，这三种残基 或消耗品。重要的是，紫外-可见光谱 其他所有化学品购自 Sigma-Aldrich。 是反映蛋白质结构的一项指标5,6。当 法也是非破坏性的，因此测量的样品 蛋白质从有序变为无序状态时，二阶 可以回收。在采用液相色谱或质谱等 样品前处理 导数光谱解决芳香族氨基酸谱带的能 技术进一步分析之前，这一关键属性 使用 Tris HCl 缓冲液 (pH 6.0) 配制抗体， 力可以监测吸光度的特定偏移。图 1 使紫外-可见光谱法成为一种理想的正 浓度为 500 mg/mL。盐酸胍 (GdnHCl) 显示了除单克隆抗体之外的游离 L-芳 交工具。 用于诱导 mAb 变性，其浓度范围为 香族氨基酸的扫描光谱和相应的二阶 0-6 M。将适量蛋白储备液 (10 mg/mL) 导数光谱。查看每个二阶导数吸收光 Cary 60 紫外-可见分光光度计是一种稳 和含 0-6 M GdnHCl 的 Tris HCl 缓冲液 谱时，这些氨基酸和蛋白质的特点可 定且高效的分析工具。基于闪烁式氙 (pH 6.0) 混合制得样品。L-苯丙氨酸、 以清晰地显现出来。二阶导数光谱中 灯的光学设计具有独特功能，可避免