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生化分离工程 第五章 生物产品萃取技术 萃取概述 萃取：利用溶质在互不相溶的两相之间分配系数的不同而使溶质得到纯化或浓缩的方法 萃取的操作流程 ①萃取剂和含有组分(或多组分)的料液混合接触，进行萃取，溶质从料液转移到萃取剂中，形成互不相溶的两相； ②分离互不相溶的两相 生物质萃取与传统萃取比较 1）生物系统的错综复杂和多组分特性 包括组分种类的复杂性和相的复杂性，其全部(或部分)特性是难以得到的。通常含有固体(细胞、培养基组分等)。固体的影响是生物产物萃取过程的一个特色，在传统的溶剂萃取过程中，一般是不考虑的。 生物质萃取对象分类 按被萃取物的分子大小，可分为 小分子类（＜1000，包括抗生素、有机酸等，） 大分子类（＞1000，酶、抗体、蛋白质→接触有机溶剂易变性） 分配系数 2）改变溶质特性 a. 弱电解质萃取 弱电解质以非离子化的形式溶解在有机溶剂中，而在水中会部分离子化并存在有电离平衡。 如青霉素在水相和有机相中分配表现出如下特点： 青霉素虽在水中可以解离，但是在水相和有机相之间分配的仅仅是青霉素游离酸(不离解的分子) 萃取过程应用举例 弱电解质萃取应用举例 b. 离子对/反应萃取 由于氨基酸和一些极性较大的抗生素的水溶性很强，在有机相中的分配系数很小甚至为零，利用一般的物理萃取效率很低，甚至无法萃取。这种情况可用离子对／反应萃取萃取解决。 萃取过程应用举例2、离子对反应萃取 eg.1）链霉素萃取 在中性条件下，链霉素与月桂酸[CH3(CH2)10COOH]可形成易溶于丁醇、乙酸丁酯和异辛醇的复合物。 弱电解质萃取应用举例2、离子对反应萃取 5.1 新型萃取技术之一——反胶团萃取 随着基因工程和细胞工程的发展，传统的分离方法(如溶剂萃取技术) 在抗生素等物质的生产中得到广泛应用，并显示出优良的分离性能。 反胶团萃取 反胶束团(Reversed mice11e)：由水、有机相及表面活性剂组成，是表面活性剂分散于连续有机相中自发形成的具有微水池结构的油包水微乳液 一、表面活性剂 表面活性剂是由亲水憎油的极性基因和亲油憎水的非极性基团两部分组成的两性分子 可分为阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂和非离子型表面活性剂 常用的表面活性剂及相应的有机溶剂见下表。 一、表面活性剂 二、临界胶束浓度（Critical Micelle Concentration） （反）胶束形成时所需表面活性剂的最低浓度，用CMC来表示 是体系特性，与表面活性剂的化学结构、溶剂、温度和压力等因素有关。 三、胶束与反胶束的形成 将表面活性剂溶于水中，当其浓度超过临界胶束浓度(CMC)时，表面活性剂就会在水溶液中聚集在一起而形成聚集体，这种水溶液中的胶束，称为正常胶束→溶解非极性物质 三、胶束与反胶束的形成 表面活性剂溶于非极性的有机溶剂中，当其浓度超过临界胶束浓度(CMC)，便会在有机溶剂内形成聚集体，这种聚集体称为反胶束。 微水池溶解和分离作用： 反胶束的微水池的水可溶解氨基酸、肽和蛋白质等生物分子, 为生物分子提供维系活力所需的亲水微环境→反胶团萃取可用于氨基酸、肽和蛋白质等生物分子的分离纯化，特别是蛋白质类生物大分子。 四、反胶团萃取蛋白质的过程 在宏观两相（有机相和水相）界面间的表面活性剂层，同邻近的蛋白质发生静电作用而变形，接着在两相界面形成了包含有蛋白质的反胶束，此反胶束扩散进入有机相中→从面实现蛋白质的萃取。 五、影响反胶团萃取的主要因素 蛋白质的萃取与蛋白质的表面电荷和反胶束内表面电荷间的静电作用、反胶束的大小有关。 任何可以增强这种静电作用或导致形成较大的反胶束的因素，都有助于蛋白质的萃取。 蛋白质溶入反胶束溶液的推动力 主要包括表面活性剂与蛋白质的静电作用力和位阻效应 A. 静电作用力：如果静电作用是蛋白质增溶过程的主要推动力，对于阳离子表面活性剂形成的反胶束体系，萃取只发生在水溶液的pH＞pI时，对于阴离子表面活性剂形成的反胶束体系，情况正好相反。 1、水相pH值对萃取的影响 水相的pH值决定了蛋白质表面电荷的状态．从面对萃取过程造成影响。只有当反胶束内表面电荷、也就是表面活性剂极性基团所带的电荷与蛋白质表面电荷相反时，两者产生静电引力，蛋白质才有可能进入反胶束。 故对于阴离子表面活性剂，pH与pI的大小关系？ 2、离子强度对萃取率的影响 ①离子强度增大→蛋白质与反胶束内表面之间的静电吸引↓→蛋白质溶解度↓ ②减弱了表面活性剂极性基团之间的斥力，使反胶束变小，从而使蛋白质不能出入其中 六、反胶束萃取应用 1、用于分离蛋白质混合物 反胶束萃取应用 2、从发酵液中直接提取胞外、胞内酶 菌体细胞在表面活性剂的作用下破裂、析出的胞内酶随即进人反胶束的水池中．再通过加入合适的溶液改变环境，酶又能被反萃取，进入水溶液。 3