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[医药卫生]Module 1 定量PCR介绍
Module1:定量PCR介绍
仪器工作原理、软件操作和定量PCR理论
定量PCR是什么?
定量PCR是什么?
一种实时监控目的基因PCR扩增的技术
2
定量PCR如何工作?
定量PCR如何工作?
• 与传统PCR一样用同样的基本成分(双链DNA,引物
,dNTPs,PCR buffer,Taq酶等等)
T G A
G T
A
C
G G A C
TGCAAACAGATTAGACATAGATAGACAGATTAGATAGACTTAGATGTTTGGCA
ACGTTTGTCTAATCTGTATCTATCTGTCTAATCTATCTGAATCTACAAACCGT
Mg2+ 2+ Mg2+
Mg
Mg2+
Mg2+ Mg2+
3
定量PCR如何工作?
定量PCR如何工作?
• 与传统PCR一样,反应在温度模块里循环进行:
双链DNA模板变性
引物与模板退火
引物延伸 新的扩增片段
例如:
一个PCR循环
理论上每经过一个
循环目的基因的数
量都会增加一倍
4
定量PCR如何工作?
定量PCR如何工作?
• PCR反应液加入了各种类型的荧光染料
5
定量PCR仪器
定量PCR仪器
• 无论是哪个型号,所有的定量PCR仪器都有三个共同
的组成部分:
2. 光源
3. 检测器
1. 热循环模块
6
定量PCR如何工作?
定量PCR如何工作?
• 在扩增过程中,荧光信号随着PCR产物的增加而增强
PCR PCR
PCR 产物
大量PCR产物
7
定量PCR如何工作?
定量PCR如何工作?
• 每个循环结束后,定量PCR仪器通过不同的滤光片记录荧光信
号的增加
循环1
滤光片A
样品1
Level:
8
• 最后,定量PCR软件计算出数据,用于实验结果的分析
9
为什么要用定量PCR?
为什么要用定量PCR?
敏感度高: 可以检测低拷贝的目的基因
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