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[医药卫生]Module 1 定量PCR介绍

Module1:定量PCR介绍 仪器工作原理、软件操作和定量PCR理论 定量PCR是什么? 定量PCR是什么? 一种实时监控目的基因PCR扩增的技术 2 定量PCR如何工作? 定量PCR如何工作? • 与传统PCR一样用同样的基本成分(双链DNA,引物 ,dNTPs,PCR buffer,Taq酶等等) T G A G T A C G G A C TGCAAACAGATTAGACATAGATAGACAGATTAGATAGACTTAGATGTTTGGCA ACGTTTGTCTAATCTGTATCTATCTGTCTAATCTATCTGAATCTACAAACCGT Mg2+ 2+ Mg2+ Mg Mg2+ Mg2+ Mg2+ 3 定量PCR如何工作? 定量PCR如何工作? • 与传统PCR一样,反应在温度模块里循环进行: 双链DNA模板变性 引物与模板退火 引物延伸 新的扩增片段 例如: 一个PCR循环 理论上每经过一个 循环目的基因的数 量都会增加一倍 4 定量PCR如何工作? 定量PCR如何工作? • PCR反应液加入了各种类型的荧光染料 5 定量PCR仪器 定量PCR仪器 • 无论是哪个型号,所有的定量PCR仪器都有三个共同 的组成部分: 2. 光源 3. 检测器 1. 热循环模块 6 定量PCR如何工作? 定量PCR如何工作? • 在扩增过程中,荧光信号随着PCR产物的增加而增强 PCR PCR PCR 产物 大量PCR产物 7 定量PCR如何工作? 定量PCR如何工作? • 每个循环结束后,定量PCR仪器通过不同的滤光片记录荧光信 号的增加 循环1 滤光片A 样品1 Level: 8 • 最后,定量PCR软件计算出数据,用于实验结果的分析 9 为什么要用定量PCR? 为什么要用定量PCR? 敏感度高: 可以检测低拷贝的目的基因

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