[医药卫生]HPV检测的进展.pptVIP

3、HPV基因分型检测结果对宫颈病变病人手术前后随访提供依据； Houfflin De bange V et al LEEP治疗205例CIN2或3的患者 术前：HPV阳性 94.1% 术后：HPV阳性 34.6% 提示：治疗后HPV仍为同一亚型阳性者，复发的可能性大 不同区域 LSIL/CIN1中常见HPV亚型的分布 In Asia, upper 95% CI for HPV16 is 39.6%, and HPV53is not shown because the denominator was 33 cases only. 4、HPV感染的流行病学调查。 5、HPV基因分型检测结果对我国开发针对于不同区域人群的HPV疫苗提供可靠的依据。 北京市正常人群筛查HPV+：23.9% HR-HPV：19.5%； LR-HPV：4.4%； Mixed-HPV：2.0% 分布前10位的亚型：16、58、52、68、CP8304、31、33、59、18and 11。 —国家十五科技攻关项目 6、疫苗引进、疫苗接种效果的评价。 不同型别的HPV机体产生特异性抗体的时间不同。 HPV16感染者会在6个月后产生特异性抗体，并持续约4个月 HPV18 的感染者与HPV16类似，血清学转化很慢。 HPV6的感染者则会在感染后很快产生抗体。 L1蛋白是HPV的主要衣壳蛋白，机体可针对其产生中和抗体。 细胞免疫在抵抗HPV感染时起重要作用。 在T淋巴细胞功能受损时，则易出现HPV感染。 细胞毒性T细胞的免疫应答主要决定于E7蛋白。 HPV疫苗主要为针对HPV L1设计的病毒样颗粒。 （L1基因也是HPV基因分型中的关键基因） HPV检测方法 中心法则 HPV抗原检测法 1.血液样本中检测HPV抗体 HPV抗体检测阳性率为50-90%，因为有部分人群感染HPV后并不能产生HPV抗体。 HPV抗体检测阳性只代表曾经感染过HPV，并不代表现在HPV感染状态。 研究表明，由于HPV亚型繁多以及人体对HPV免疫应答差异很大，抗体检测法的阳性率和特异性都不理想。 妇女中有20%-50%的人呈ＨＰＶ ＤＮＡ阳性而不能检出型特异性抗ＨＰＶ抗体,可能是由于被感染者过期抗体效价已下降。 随访研究证实,ＨＰＶ ＤＮＡ检出后6-18个月间常发生血清转移。短暂ＨＰＶ ＤＮＡ检出病例罕见抗HPV抗体。 因此，很多学者认为HPV抗体检测意义不大。 2.局部组织/细胞/分泌物样本 抗体检测抗原 检测HPV的衣壳蛋白L1,L2。 因潜伏状态的存在，灵敏度不足， 不能分型（基因分型）。 HPV-DNA检测方法 1、传统杂交方法：原位杂交/Southern印迹杂交/斑点杂 该法不能达到临床所需的灵敏度,且操作繁琐、费时耗力，不适合于大通量临床样品的筛查,目前较少使用。 2、HC-Ⅱ（杂交捕获法） 灵敏度为95%左右，特异度为85%左右 3、PCR方法 ①型特异PCR： 型特异PCR试验基于HPV亚型E6、E7基因序列的差异而设计。此类试验可检测出每个反应中的10~200copies的HPV，电泳后染色显示结果。通过型特异性PCR对HPV进行分型通常用于研究，因为每一份样本通常要进行多个PCR反应。 ②通用引物PCR： 在一个PCR反应中，用1套引物可以扩增多种HPV亚型。这种引物通常针对HPV基因组中的保守区域设计，例如 L1衣壳蛋白基因。这种检测方法的敏感性大约10–200 DNA copies。 ③实时荧光PCR (real time PCR) a.分型检测：需要多管反应 b.不分型检测：多种亚型在一管内检测 4.导流杂交HPV基因分型检测 应用： 可以快速准确诊断临床尖锐湿疣体表面脱落细胞、妇女宫颈细胞及宫颈粘液标本中33种HPV病毒DNA的存在。 可作为临床可疑尖锐湿疣确诊、宫颈癌病因确定、早期筛查，治疗效果监测的诊断依据。 核心技术：导流杂交原理 DNA快速杂交装置 美国发明专利：5741647 美国