应用性控精液和体外受精技术生产牛体外性控胚胎的研究与应用.DOCVIP

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应用性控精液和体外受精技术生产牛体外性控胚胎的研究与应用

应用性控精液生产牛体外胚胎的研究进展 孙凤俊,张佳谊,韩广文 (北京奶牛中心延庆基地 北京102100) 摘要:通过性控精液生产体外胚胎技术是获得预知后代性别的一种有效方法。上个世纪90年代,利用流式细胞仪能够将精液中X精子和Y精子分离,使家畜繁育过程中实现性别选择成为可能,目前性控精液分离的准确率达90%以上。然而,性控精液受精率低,冷冻保存后精子活力低,而且在特定的时间内,能够分离的精子数量少。本文将讨论这些问题,同时还将重点阐述应用性控精液生产牛体外胚胎的诸多影响因素及其研究进展。 关键词:牛; 体外胚胎;性控精液 1.前言 几千年来,家畜养殖者一直企盼能有一种方法预先知道家畜后代的性别,对从事奶牛生产而言,就是希望多生母牛。上个世纪90年代能够将带有X染色体和带有Y染色体的精子分离出来,使畜牧生产者选择性别开展繁育家畜后代的梦想变为现实[1]。利用流式细胞仪分离的性控精液准确率达90%以上[2]。有许多综述文章阐述性控精液在养牛业生产中的应用[3]以及利用性控精液进行人工授精和胚胎体外生产[4]等方面的研究。本文重点阐述利用性控精液进行胚胎的体外生产及发展前景。 性控精液应用中存在的一个主要问题是性控精液比常规精液受精率略低,而且性控精液用于人工授精的输精剂量比常规精液少]。当每次性控精液输精的精子数量与传统人工授精的精子数量相同时,性控精液受胎率只是常规精液的60%~80%。另一个问题是性控精液冷冻后活率下降[5]。Schenk等[5]试验后认为应用流式细胞仪分离的性控精液冷冻解冻后,与常规精液比较,精子活率和顶体完整率都有所下降。 性控精液生产的主要障碍之一就是精子分离速度太慢。采用新一代流式细胞仪[6]速度有所提高。流式细胞仪喷嘴定向改进后,分离精子速度由每秒几十个精子提高到每秒约8000 个[7],准确率达到90% 以上。 2.应用性控精液进行胚胎体外生产(IVP)的应用研究 由于体外受精(IVF)所需要的精子数量很少,所以多年来,许多研究人员探索应用性控精液进行体外胚胎生产 [3,8,10]。然而,有许多问题影响应用性控精液生产牛体外胚胎的成 功率[7]。这些问题包括受精率低,卵裂率低,囊胚率低,受胎率低,精子部分获能,精子样品稀薄],和公牛变异效应等。在大量的实验研究中,用牛性控和常规冷冻精液对卵母细胞的受精率无显著差异,但是性控精液鲜精组卵裂率低于(66%对比76%)常规精液的对照组(P 0.01)。然而,在该研究中,性控冷冻精液组与常规冷冻精液组卵裂率没有差异。另外,使用性控精液组和常规精液组第一细胞周期发生时间相近。研究中观察到性控精液分离过程对卵裂率影响不大,但性控精液无论鲜精还是冻精都对卵母细胞发育到囊胚的数量有显著影响。研究报道使用性控精液囊胚发育率是使用常规精液囊胚发育率的70%[8]。这些结果与以往报道的结果相近[9]。Wilson RD,等(2005)应用活体采卵(OPU)获得的卵母细胞采用性控精液受精比采用常规精液受精的囊胚发育率低。应用常规精液受精的卵母细胞囊胚发育率约为30%~40%,应用性控精液的囊胚发育率在10%~20%之间。 Zhang M,等(2003)在一项研究中[10],观察到不同的结果。该研究检验牛卵母细胞使用冻精受精后发育状况。精液来源于三头公牛,分三个处理组:(1)用Hoechst 33342染色 资助项目:北京市奶牛良种选育与繁育体系建D12110500330000 作者简介:孙凤俊,男,1958年10月出生,辽宁省岫岩县人。北京奶牛中心科研中心研究员,主要从事奶牛繁殖技术研究。Email:fjsun1958@163.com 并用流式细胞仪进行分离;(2)染色,但不分离;(3)不染色,也不分离(对照组)。三个处理组之间,囊胚发育率没有差异,但是,从卵裂率看,使用染色并分离的精子处理组(53.1%)和使用染色但未分离的精子处理组(59.9%)都显著低于对照组的未经染色又未分离的精液(69.9%),X精子和Y精子之间没有差异。此外,由于公牛来源不同,卵裂率和囊胚发育率都表现明显差异[10]。吴冬生等(2009)[11]研究对比了3头种公牛分离精液与未分离精液体外受精效果,比较了不同公牛不同类型精子对卵裂率与囊胚率的影响。3头公牛分离冻精的卵裂率明显低于未分离冻精(P0.05),囊胚发育率除了1号种公牛分离冻精的较低外,其他2头牛与对照组比较都无显著差异(P>0.05)。3头公牛的未分离冻精受精后的卵裂率差异不显著(P>0.05),2号种公牛分离冻精的卵裂率高于1号和3号(P0.05)。刘敬浩等(2010)通过3头性控精液与常规精液比较试验[12],1号种公牛分离冻精的卵裂率都显著性降低(P0.05)。1号种公牛分离冻精组的原核形成率、卵裂率与2、3号种公牛分

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