[高等教育]第六章 微生物的生长及其控制1周德庆 《微生物学教程》.ppt

稳定期与生产实践 SCP收获期 ：以菌体量为主的最佳收获期 产物收获期：与菌体相平行的代谢产物的收获 生物测定：宜作生物测定的菌源（维生素、碱基、氨基酸） 连培的依据：启示连续培养的主要依据 （4）衰亡期（decline phase） 概念：群体中个体死亡速度超过新生个体速度。 特点： 负 增 长：R 为负值；细胞形态多样，产生膨大与不规则退化形态 自溶现象：菌体常发生自溶现象 芽胞释放：产芽胞菌体常在此期释放芽胞等 次生代谢物累积 衰亡期到来原因 失调： 碳氮比严重失调 耗尽： 培养基内营养物近耗尽 恶化： 培养环境的进一步恶化 原因： 分解代谢大于合成代谢，从而导致大量菌体进入死亡期 连续培养 分批培养（batch culture） ：又称封闭培养（closed culture），将微生物置于一定容积的定量的培养基中培养，培养基一次性加入，不再补充和更换，最后一次性收获。 连续培养（continuous culture） ：又称开放培养（open culture），在微生物培养的过程中，不断地供给新鲜的营养物质，同时排除含菌体及代谢产物的发酵液，让培养的微生物长时间地处于对数生长期，以利于微生物的增殖速度和代谢活性处于某种稳定状态。 连续培养的实现 通过认识稳定期到来的原因，并采取有效措施实现。 当微生物以单批培养的方式培养到指数期的后期时，一方面以一定的速度连续流入新鲜培养液（并通入无菌空气，立即进行搅拌）；另一方面以同样流速流出发酵液至动态平衡。 特点：可使发酵长期保持在指数期的平衡生长状态和衡定的生长速率上。 连续 培养器 按控制方式分 按培养器的级数分 按细胞状态分 按用途分 内控制（控制菌体密度）：恒浊器 外控制（控制培养液流速、以控制生长速率）：恒化器 单级连续培养器 多级连续培养器 一般连续培养器 固定化细胞连续培养器 实验室科研用：连续培养器 发酵生产用：连续发酵罐 连续培养器 两种连续培养器的比较 微生物的连续培养 连续培养的优缺点 优点：高效；自控；稳定；节约 缺点：菌种易退化；易污染杂菌；营养物的利用率低 应用：酵母菌单细胞蛋白（SCP）、乙醇、乳酸等发酵、污水处理 微生物的高密度培养（HCDC） 也称高密度发酵，一般指微生物在液体培养基中细胞群体密度超过常规培养10倍以上时的生长状态或培养技术 选取最佳培养基成分和各成分含量 补料 提高溶解氧的浓度 防止有害代谢产物的生成 高密度培养实例 E.coli的高密度培养理论值：可达到200g(湿)/L～ 400g/L，即使为200g/L， 则发酵液中菌体约占1/4，其流动性丧失 E.coli的高密度培养报道值： PHB的工程菌为175.4g/L，W3110菌株菌值174g/L 获取HCDC必须综合考虑与充分运用各菌株的生长繁殖的规律，以获取最佳效果 小结 名词解释 生长曲线 连续培养 高密度培养 * 生长是一个逐步发生的量变过程 繁殖是一个产生新的生命个体的质变过程 在单细胞的生物里，生长和繁殖两个过程是紧密联系很难划分的。 * 定 量 定 容： 将一定量的微生物的细胞接到一定体积的容器内，置于适宜的条件下培养。 群 体 代 谢： 容器内的细胞按其群体自身的生命活动的规律进行群体的新陈代谢。 同 化异 化：当其内的生物细胞群体的同化大于异化作用时。 生物量增加: 容器内微生物细胞的原生质量不断增加之现象称谓微生物的群体生长。 * （图中的数字为小时） * * * 同步生长的概念：采用一定的方法使细胞群体处于分裂步调一致的状态，称为同步生长。 环境诱导法：通过环境条件的变更来诱导细胞生长的同步。例如变换温度、光线或对于稳定期的培养物添加新鲜培养液来实现。 物理学方法： 通过物理学方法从随机的、不同步的细胞群体中选择出同步的个体群。例如选择性过滤或梯度离心法来达到。 * 将异步生长的菌液通过垫有硝酸纤维薄膜的滤器，不同生长阶段的细菌均吸附于膜上，然后翻转滤膜，用无菌的新鲜培养液慢速洗脱，最初流出的是未吸附的细胞，不久，膜上细胞开始分裂，分裂后的子细胞有的不与膜接触易随培养液流下。若滤膜面积足够大，只要收集刚滴下的子细胞培养液即可获得满意的同步生长的细胞。 * 定量描述液体培养基中微生物群体生长规律的实验曲线，称为生长曲线(growth curve)。当把少量纯种单细胞微生物接种到恒容积的液体培养基中，在适宜的温度、通气等条件下，该群体就会由小到大，发生有规律的增长。如以细胞数目的对数值作纵坐标，以培养时间作横坐标，就可画出一条由延滞期、指数期、稳定期和衰亡期4个阶段组成的曲线，这就是微生物的典型生长曲线。说其“典型”，是因为它只适合单细胞微生物如细菌和酵母菌， * * * 如大肠杆菌胸腺嘧啶缺陷型菌株在缺少胸腺嘧啶