应用化学系物理化学试验试验8.PDF

應應用用化化 學學系系物物理理化化 學學實實驗驗 實實驗驗 88. 應應用用化化 學學系系物物理理化化 學學實實驗驗 實實驗驗 88 應應用用化化 學學系系物物理理化化 學學實實驗驗 實實驗驗 88. 應應用用化化 學學系系物物理理化化 學學實實驗驗 實實驗驗 88 羧基羧基化螢光素化螢光素 p K及及 K 值之測量值之測量 羧基羧基化螢光素化螢光素 及及 值之測量值之測量 SV Measurements of p K and KSV of Carboxyfluorescein 實驗報告重點實驗報告重點 實驗報告重點實驗報告重點 預預 報報 重重 點點 預預 報報 重重 點點 現象與定義現象與定義 現象與定義現象與定義 1. 螢光光譜之基本原理 。Emission 與 Absorption 光譜之定義 。 2. 何謂螢光量子產率 ？影響螢光光譜訊號之變數有哪些? 3. 何謂螢光之消光 (quenching)現象 ? Stern-Volmer constant (KSV)及 quenching rate(k)之定義為何? 4. 繪製 carboxylfluorescein 分子並由網路資訊蒐尋 fluorescein 之螢光光譜 5. 溶液氧含量及 pH值對 carboxyfluorescein螢光訊號有何影響 ？ 6. 何謂 pK? 如何使用螢光光譜技術測定 carboxyfluorescein 之 pK值？ 請參考儀分課本( 以及定義與原理定義與原理作答 ) 定義與原理定義與原理 測量與操作測量與操作 測量與操作測量與操作 1. carboxyfluorescein 之 absorption及 emission 光譜 2. 在不同 pH條件下之 carboxyfluorescein emission 光譜 3. 配製 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.7, 1, 4 µM carboxyfluorescein 樣品並測量其 emission 光譜 4. 配製 10份 0.2 µM carboxyfluorescein 樣品依次含有 0 至 200 mM 之碘化 鉀 (KI) ，pH=7 。 結結 報報 重重 點點 結結 報報 重重 點點 1. 繪出 carboxyfluorescein 之 absorption及 emission 光譜 。標示結果。 2. 列表並作圖列表並作圖 ：[515 nm波長之螢光強度 vs pH ] ；並計算carboxyfluorescein pK 列表並作圖列表並作圖 值。 3. 列表並作圖列表並作圖 ：[515 nm波長之螢光強度 vs carboxyfluorescein濃度 ] ；討論濃 列表並作圖列表並作圖 度對螢光之影響 。 4. 列表並作圖列表並作圖 ：[螢光強度比值 (F /F) vs KI 濃度 ] ；F 是 [KI]=0時 列表並作圖列表並作圖 0 ] 0