[工学]简明微生物工程 4培养基的制备.ppt

第四章 培养基的制备 第一节 培养基的原材料 一、培养基的营养成分 碳源营养 氮源营养 无机盐及微量元素 水 生长因子、前体物质、产物促进剂和抑制剂 碳源 葡萄糖、寡糖、多糖、糖蜜、脂类、 烃类 碳源主要用来供给菌种生命活动所需的能量和构成菌体细胞以及代谢产物的物质基础。 氮源 无机氮源：氨水、铵盐、硝酸盐、亚硝酸盐 有机氮源：各种豆粉、玉米粉、棉子饼粉、花生饼粉、各种蛋白粉、鱼粉、蚕蛹粉、某些发酵的废菌丝体粉、酿酒工业的酒糟以及实验室常用的牛肉膏、蛋白胨等等。 氮源主要用来构成菌体细胞物质和代谢产物，即蛋白质及氨基酸之类的含氮代谢物。 无机盐及微量元素 大量元素：P、S、K、Mg、Ca、Na、Fe 10-4-10-3mol/L 微量元素:Cu、Zn、Mn、Mo、Co等 10-8-10-6mol/L 主要功能是构成菌体的成分，作为酶的组成部分或维持酶的活性，调节渗透压、pH、氧化还原电位等。 生长因子 维生素、碱基、卟啉及其衍生物、某些氨基酸 特殊生长因子的主要功能是构成辅酶的组成部分，促进生命活动进行。 前体物质 1、前体物质的利用往往与菌种的特性和菌龄有关。 2、当前体物质是合成过程中的限制因素时，前体物质加入量越多，抗生素产量就越高。但前体物质的浓度越大，利用率越低。 促进剂和抑制剂 1、对产酶影响 酶制剂发酵过程中，某些诱导物、表面活性剂及其他一些产酶促进剂，可以大大增加菌体的产酶量。 添加诱导物，对产诱导酶(如水解酶类)的微生物来说，可大幅度提高产酶量，这在生产酶制剂新品种时尤其明显。一般的诱导物是相应酶的作用底物或一些底物类似物，这些物质可以“启动”微生物体内的产酶机构。 在培养基中添加微量的促进剂可大大增加某些微生物酶的产量。 常用的促进剂有各种表面活性剂(洗净剂、吐温80、植酸、洗衣粉等）、二乙胺四乙酸、大豆油精抽提物、黄血盐、甲醇等。 原理：改进细胞的渗透性，同时提高氧的传递速度，改善了菌体对氧的有效利用。 2、对合成抗生素的影响 (1)有的可能起生长因子的作用； (2)有的可推迟菌体的自溶； (3)有的是抑制了某些合成其他产物的途径而使之向所需产物的途径转化(见表)； (4)有的是降低了产生菌的呼吸，使之有利于抗生素的合成； (5)有的可改变发酵液的物理性质，改善通气效果； (6)有的可与抗生素形成复盐，从而降低发酵液中抗生素的浓度和促进抗生素的合成。 抗生素的抑制剂 3、对氨基酸发酵的影响 （1）谷氨酸发酵防止噬菌体污染：氯霉素、多聚磷酸盐、植酸 （2）赖氨酸发酵防止营养缺陷菌株发生回复突变 ：红霉素 (3)甘油生产中加入亚硫酸氢钠 二、培养基的类型 1、按化学成分的了解程度来分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基。 2、按外观物理状态来分： 液体培养基：用于大规模工业生产及摇瓶发酵。 固体培养基：添加1.5－2%琼脂，用于分离、鉴定、计数、保藏。 半固体培养基：加入0.2－0.7%琼脂：观察运动性，噬菌体效价测定等工作。 脱水培养基：商业化的合成培养基，使用时加水灭菌即可。 3、按用途分： 1）基础培养基(minimum medium)：在一定条件下含有某种微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基，也称为基本培养基。 2）完全培养基(complete medium)：在一定条件下含有某种微生物生长繁殖所需的所有营养物质的培养基。牛肉膏蛋白胨培养基就是枯草芽孢杆菌等的完全培养基。  3）选择培养基(selective medium)：用于将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基，根据不同种类微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不同，在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。 4）鉴别培养基(differential medium)：用于鉴别不同类型微生物的培养基特定的化学反应，产生明显的特征性变化，根据这种特征性变化，可将该种微生物与其他微生物区分开来。 5）加富培养基或富集培养基 在普通培养基（如肉汤蛋白胨培养基）中加入某些特殊营养物质制成的一类营养丰富的培养基。这些特殊营养物质包括血液、血清、酵母浸膏、动植物组织液等，用来培养营养要求比较苛刻的异养型微生物，如培养百日咳博德氏菌(Bordetella pertussis)需要含有血液的加富培养基。 三、发酵培养基的选择 1.菌种来源、习性、生理生化特性； 2.对菌种培养条件、产物结构及合成条件、下游分离手段有所了解； 3.用化学合成培养基做摇瓶实验； 4.小罐实验； 5.注意观察菌体生