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基因工程受体的研究 摘要：随着基因工程的广泛应用，基因工程中每一个环节都需要我们充分而且深入的研究。受体的研究也是其中一个重要部分，无论是真核受体还是原核受体，都发挥着重要的作用值得我们研究。 关键词: 基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。 　　基因工程是利用重组技术，在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对各种生物的核酸（基因）进行改造和重新组合，然后导入微生物或真核细胞内进行无性繁殖，使重组基因在细胞内表达，产生出人类需要的基因产物，或者改造、创造新的生物类型。 　　基因工程包括把来自不同生物的基因同有自主复制能力的载体DNA在体外人工连接，构成新的重组的DNA，然后送到受体生物中去表达，从而产生遗传物质和状态的转移和重新组合。 基因工程要素：包括外源DNA，载体分子，工具酶和受体细胞等。 受体细胞分为真核细胞受体系统和原核细胞受体系统。真核细胞受体系统主要有双歧杆菌、乳酸杆菌、芽孢杆菌；原核细胞受体系统主要有酵母菌、哺乳动物、植物细胞。 1．1乳酸杆菌 乳酸杆菌作为主要的益生菌已广泛应用于食品及饲料加工业，构建具有广泛宿主范围的质粒载体系统已十分成功地转化到乳酸菌并表达内源及外源蛋白，在功能食品、医疗保健、微生态制剂等领域的应用具有诱人的前景。如荷兰学者将人脑蛋白多肽基因转入乳杆菌后，给小鼠、大鼠口服，发现可抑制实验性过敏性脑脊髓炎。另外，Okafor等将编码8一赖氨酸的合成赖氨酸基因克隆至载体pBLuescript，以Lac为启动子，该合成的赖氨酸基因可成功地转化E．coli—DH一5d及几种乳杆菌。经转化后，赖氨酸分泌量可提高2．5～6倍。乳酸杆菌另一个在医学领域具有很大应用潜力的方向是将其作为某些免疫接种的疫苗载体。乳酸杆菌作为疫苗载体具有较大的优越性：(1)在呼吸系统、消化系统、泌尿系统定植，对维持微生态平衡很重要；(2)在发酵食物中应用了几个世纪，被认为是GRAS(Generally Recog．nized As Safe)微生物；(3)同肠胃外免疫途径相比，通过黏膜免疫，可以诱发IgA产生；(4)免疫方便、便宜、安全，不需要注射；(5)具有免疫佐剂作用；(6)同其它活载体(如减毒大肠杆菌、沙门氏菌、病毒)相比，乳酸杆菌作载体无免疫原性，所以无病原性、食物级或共生、共栖性的乳酸杆菌作为疫苗载体受到广泛关注。研究表明，干酪乳杆菌与植物乳杆菌具有很强的免疫刺激能力，目前已用于表达炭疽杆菌抗原以及破伤风毒素片断c抗原等，鼻腔内应用产生了系统的IgG与局部IgA抗体。(Mercenier，1999；shaw等，2000； zegers等，1999)。Philippe等用副干酪乳杆菌在细胞内已成功地表达了霍乱毒素B亚单位。PascalHols等在乳杆菌中表达了M6一gp41E模型抗原，还有人在乳杆菌中成功表达了提取抗原prtB—Ttmim(蛋白酶一破伤风毒素)，可诱导全身和局部免疫反应。这些研究成果表明，乳杆菌作为基因工程受体菌的应用前景十分广阔。 1.2芽孢杆菌 芽孢杆菌是一类耐高温、高压及低pH值的有益微生物，用作饲料添加剂不论是在颗粒还是在液体饲料中都较稳定。芽孢杆菌以孢子状态进入畜禽肠道生长繁殖，消耗肠内氧气，造成厌氧环境，使乳酸菌、双歧杆菌增加，大肠杆菌减少。鉴于以上优点，人们从分子生物学的角度对其进一步开发研究，迄今为止，芽孢杆菌是除大肠杆菌外研究得最为透彻的细菌。已从该细菌中克隆了数十种基因，建立了完整的基因克隆和表达操作程序。从长远的观点看，芽孢杆菌也许会取代大肠杆菌的地位，成为重要的基因工程受体菌。四川农业大学的倪学勤等选择赖氨酸产量高的菌株作为受体菌，在芽孢杆菌中表达赖氨酸合成酶基因，结果表明，外源质粒转化频率高，能在其中长期保存且高水平表达。任立明等用随机整合法将高温d一淀粉酶基因整合到芽孢杆菌DNA中，在芽孢杆菌中表达，生产耐高温的仅一淀粉酶，应用于生产可起到双重效果。由于活菌益生素不能在肠道内长期定植，需要通过日粮添加，人们还设想通过基因工程，让暂住性芽孢杆菌等益生菌获得“永久性”定居因子，以便在肠道持续发挥作用。 1.3酵母菌 酵母菌是单细胞真核生物，具有生长快、易于遗传操作、能对外源蛋白进行翻译后加工和修饰、不产生有毒产物等特点，被认为是表达外源蛋白的合适宿主。1997—1999年，国家海洋局海洋生物工程重点实验室，应用原生质体融合技术和现代分子遗传学技术，构建成功并综合鉴定出由光合细菌原核细胞和酿酒酵母真核细胞跨界融合而成的基因工程菌，用于表达外源基因具有诱人的前景。目前作为受体菌的酵母有：酿酒