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上海外国语大学附属外国语学校 顾晓宇 徐汇中学 马晨辰 指导老师：张卫良、何剑峰 项目简介 实验准备 实验数据与分析 项目实际意义 创新点 回顾与展望 QA 课题的由来 在课余时间，花卉的组培是我们的兴趣、爱好之一。在平日的探究过程中，我们发现花卉组培的第一和第三阶段是污染率相对较高的阶段，同时也是操作最为复杂的两个阶段。这两阶段在花卉组培中非常关键。我们考虑尝试通过建立开放式的操作方式和创新的消毒方法来达到我们简化操作，提高成功率的目的。 项目简介 研究通过建立新的茎尖外植体剥取流程和消毒方法，无菌增殖苗分切方法以及带菌基质诱导生根等，解决彩色马蹄莲和非洲菌快速繁殖过程中，茎尖材料剥取较为复杂、污染率较高、成活率较低，以及生根、驯化过程烦琐、成功率较低等问题。改进后操作为：1、茎尖外植体剥取消毒：选取彩色马蹄莲和非洲菊健壮植株，采取顶芽或侧芽，并用洗涤剂清洗；在流水和开放环境下剥取茎尖外植体；在无菌环境下采取先用升汞溶液短时消毒，再用硫酸链霉素溶液处理的联合消毒方法；2、开放式生根培养：将非洲菊增殖幼苗在开放式的环境下进行分切，并将浸蘸过激素混合液的幼苗接种在施加有保护性杀菌剂的带菌基质上，进行开放式的培养。 无菌体系的建立 研究计划 本研究的主要目的是解决植物组织培养过程中，无菌体系建立和生根阶段培养这两部分所突出的操作复杂，污染率较高，成功率较低的问题。本研究中，主要通过建立新的茎尖剥取流程，并采用升汞与抗生素的协同作用来解决并达到第一个目的目的。通过建立开放式生根培养来达到第二个目的。 实验过程 1、探索可能的茎尖剥取改进方案； 2、验证新的茎尖剥取流程的可行性和效果； 3、通过实验得出适合于新流程的升汞和抗生素的浓度及消毒时间； 4、验证开放式生根培养，并使用较佳的激素配比方案 实验结论 实验结果表明，在开放环境下剥取茎尖外植体，采用升汞0.01%，消毒4分钟，再用硫酸链霉素5000ppm，处理30分钟的联合消毒方法，有效达到了降低污染率，提高成功率的目的。其效率比传统茎尖外植体剥取方法提高了40%左右，成功率提高了30%到60%左右。同时，实验在完全开放的环境中分切无菌增殖苗，并用带菌基质诱导生根，简化了快速繁殖无菌苗移栽过程中生根诱导、无菌苗驯化、炼苗等过程，极大地提高了生产效率。 创新点 1、创新的茎尖剥取消毒方法 2、通过实验比对、筛选得出较适合新的茎尖外植体获取方法的升汞消毒浓度及消毒时间。 3、通过升汞与抗生素的联合消毒作用，达到进一步降低茎尖外植体的污染率，提高茎尖外植体成活率的目的。 4、使用开放式的生根培养模式，降低了生产成本，简化了操作，同时提高了训苗期幼苗的抗性。 茎尖剥取方法对比 实验准备 实验材料： 彩色马蹄莲植株（鲜黄）、非洲菊幼苗（粉红绿心） 工具及试剂： 手术刀、升汞（0.1%-0.005%）、硫酸链霉素（1000ppm-10000ppm）、组培瓶等 实验准备 培养条件：MS+6-BA(1.0)+NAA(0.1)的琼脂培养基中，蔗糖30克/升，pH5.8。培养条件：光照1500Lx、12h/d，温度22℃。 实验设计： 1、不同升汞浓度对新的茎尖剥取方法下的茎尖组织的消毒效果---目的： 找出在此条件下最佳的升汞消毒浓度 2、不同抗生素浓度对其消毒效果 目的：（1）检验抗生素在茎尖剥取中抗菌效果 （2）找出最佳的抗生素浓度 实验数据 实验数据 实验分析 实验分析 实验分析 1、高浓度的升汞杀菌剂可以有效的消灭细菌。浓度越低，其污染率增速加快（图表中表现为斜率变大）。 2、高浓度的升汞杀菌剂对幼嫩的茎尖本身也有较大的伤害作用。（在实验中出现了由高浓度升汞溶液所导致的茎尖全部或部分死亡。） 3、升汞消毒浓度与茎尖剥取成功率成先上升后降低的趋势。其主要原因是，在浓度较高时，茎尖的死亡率较高，而升汞浓度降低后其污染率有大大提高。0.01%的升汞消毒浓度是相对较佳的（4分钟）。 实验数据 实验数据 实验分析 实验分析 效果对比 效果 1、简化茎尖剥取过程，提高了生产效率 2、降低了污染率 3、提高了成功率，降低生产成本 展望 1、希望此茎尖剥取方法能在更多的花卉上应用。2、生根阶段开放式培养已经在非洲菊上有较好的应用，在下一步，我们将在彩色马蹄莲等其他观赏性花卉上使用此方法。3、配置复合抗生素杀菌剂，并使用在茎尖剥取消毒中，或加在增殖阶段的幼苗基质中，或使用这种复合抗生素代替恶霉灵，起到生根阶段保护幼苗的作用。4、希望能在幼苗增殖阶段的开放式培养有所突破，使得其能形成一个更加完整的开放式组培体系。 回顾与展望 * 彩色马蹄莲及非洲菊快速繁殖技术改进初探