霍乱弧菌检测20140506PPT.pptVIP

?挑取粪便，直接接种于碱性蛋白胨水（第一管）中，同时划线分离选择性平板（庆大／四号／ＴＣＢＳ平板，第一板）。 ?第一管碱性蛋白胨水在３７ ℃增菌６－８小时，沾取菌膜下表层液体，划线分离选择性平板（庆大／四号／ＴＣＢＳ平板，第二板），同时吸取0.1～0.2 ml表层培养物，接种碱性蛋白胨水（第二管）。 ?第二管碱性蛋白胨水增菌１８小时后划线分离选择性平板（庆大／四号／ＴＣＢＳ平板，第三板）。 分离培养要点（两管三板法）： ? 经典的鉴定步骤要求每个平板应挑取5个以上可疑菌落,转种于克氏双糖斜面或者普通琼脂斜面待分纯培养后,再进行O1、O139群血清玻片凝集试验，鉴于对霍乱疫情应急处理的考虑,现大多数监测实验室一般采用将血清玻片凝集试验前置的做法,作为快速筛查的手段,直接对平板上生长的单个可疑菌落进行玻片凝集试验,出现明显凝集时可做初步报告,对平板上出现可疑凝集的菌株必须马上转种于克氏双糖斜面或者普通琼脂斜面,待纯培养物生长良好后再次进行玻片凝集试验加以确证。 ?庆大霉素平板和4号琼脂：多呈半透明状，菌落中央常呈灰色或灰黑色，并随培养时间的延长而加深（由于这类培养基均含有亚碲酸盐成份）。 ?TCBS（硫代硫酸盐枸櫞酸盐胆盐琼脂）：菌落生长呈黄色发亮、表面光滑、润湿、稍凸起、边缘整齐。 （TCBS平板生长的菌落不能直挑取进行玻片凝集试验，需按经典方法进行纯培养后再进行玻片凝集试验） 可疑菌落的挑取 4号平板 * * 宁波市疾控中心 微生物检验所 杨 元 斌 May 6th, 2014 霍乱弧菌的检测 学习要点： 霍乱弧菌概述与分类 霍乱弧菌的标本采集 霍乱弧菌的分离培养 霍乱弧菌的鉴定 霍乱弧菌（V.cholera）是人类霍乱的病原体，霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病之一。曾在世界上引起多次（7次）大流行。 典型临床表现：剧烈的呕吐、腹泻（无痛性） 、米泔水样便、脱水，死亡率甚高。属于国际检疫的烈性传染病。 一、概述 大便≈小便 病原学 形态：霍乱弧菌属于弧菌科弧菌属，革兰染色阴性菌体短小，稍弯曲，两端钝圆，长1.5～2.0μm,宽0.3～0.4μm 。 菌体尾端有单鞭毛，运动极为活泼，在暗视野显微镜下呈流星样运动，培养温度以37℃为最适宜，在碱性（PH8.8～9.0）肉汤（或蛋白胨）培养基上易于生长（耐碱怕酸） 革兰染色 鞭毛染色 霍乱弧菌涂片、染色 1、古典生物型（前6次大流行） 2、E1 Tor 生物型（第7次 1961年来）。 两个生物型具有相同的血清型。我国流行以El Tor霍乱弧菌为主。 O1群霍乱弧菌的生物型 古典生物型与El-Tor生物型区别 特征 古典生物型 El-Tor 生物型 羊红细胞溶血 - D 鸡红细胞凝集 - + V-P试验 - + 多粘菌素B敏感试验 + - IV组噬菌体裂解 + - V组噬菌体裂解 - +  O1群霍乱弧菌的血清分型及抗原成份 型别 别名 O抗原成份 原型 稻叶型（Inaba） A、C 异型 小川型（Ogawa） A、B（少量C） 中间型 彦岛型 （Hikojima） A、B、C O139群霍乱弧菌 1992年，在印度印度马德拉斯、泰米尔纳德发生的霍乱疫情，分离到的菌株不与O1群霍乱血清凝集，但是引起O1群霍乱的典型症状。引起WHO重视，定为O139群霍乱弧菌，被认为下一次霍乱大流行主角。 非O1群霍乱弧菌（O139霍乱） 生化特征与O1菌基本相同。 含有与O1群霍乱弧菌相同毒力基因 除O抗原不同外，其它性状均与EL-Tor生物型相似。 毒力蛋白及其调控因子与El-Tor霍乱具有高度同源的编码。 O139霍乱弧菌菌可以产生荚膜 与O1群霍乱无交叉免疫力 环境适应能力强 耐药性强 O139群霍乱弧菌的生物学特征 二、标本的采集与送检 概述： 标本采集： ?病例：粪便、肛拭子、呕吐物 未使用抗生素之前 “健康”人：粪便、肛拭子 其他传播环节的标本：食物、水、环境类样品…… ?监测：水样，水产品等 标本运送： 一般要求在6小时内室温（20-25 ℃ ）条件下送达实验室检测， ? C-B运输培养基（pH8.4）; （或文腊二氏保存液） ? 碱性蛋白胨水（pH8.4-9.2） ： 培养基质量的保证：碱性胨水要澄清透明（表明未长细菌）、 8-10ml量要足。不符合规定，立即通知相关实验室或CDC更换。 便量合适：不要太少，不能太多（改变培养基的pH）。 送检及时：6h内送检。 1、粪便标本 （1）采样 逢疑必采 应在发病早期，服用抗菌药物之前完成，并尽快送到检验室。粪便标本采集方法如下：用棉拭子采取自然排出的新鲜大便，也可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内3cm-5cm处