利用单分子操控术进行DNA奈米剂量之创新研究.DOCVIP

利用單分子操控術進行DNA奈米劑量之創新研究 許志楧 吳見明 樊台清 董傳中 江國寧 江啟勳 洪志宏 羅建苗 許文郁 許靖涵 根據醫學統計，人類每三到四人中就有一人在其有生之年罹患癌症。而輻射治療為治療癌症的主要方法之一。輻射治療劑量學從早期之組織層級的巨觀之劑量(dosimetry)到一、二十年前開始進入細胞層級的微劑量(microdosimetry)，這一、兩年來以DNA分子為主要探討標的奈米劑量(nanodosimetry)則剛萌芽。在從事輻射治療的過程中，輻射劑量在治療部位的分佈之計算評估(專業術語為：輻射治療計畫Treatment Plan)，為輻射治療最關鍵的工作之一。因為唯有精確的劑量評估才能達到有效的殺死癌細胞並且對正常細胞/組織的殺傷力降到最低。這就像對某種疾病我們已研發出非常有效的葯物，但是若不知正確的使用劑量，則可能不是用量太低而無效；就是用量太重而毒性太高。而輻射劑量的評估是一個非常複雜的三度空間及時間的問題，它亦涵蓋了物理、化學、生物醫學的知識。要達到精確的輻射劑量評估，就要有精確的輻射劑量物理模式(Model)，而要驗證及修改所建構的輻射劑量物理模式則需要有實驗相互輔助。從整個巨觀之劑量學到微劑量的發展都是如此的，以模式和實驗交互成長而來。而輻射對細胞的殺害主要是打斷DNA分子(2nm寬)的作用。故要精確的評估輻射劑量必然有賴於正確的奈米劑量物理模式的建立。而單分子操控技術則提供了最直接的實驗數據來驗證及修改所建立的奈米劑量物理模式。而其最終的正確性則需要輻射生物/醫學的驗證(子計畫4)。奈米劑量對輻射治療的重要性可以由目前的一個臨床經驗看出。肝癌一直被認為很難由輻射治療來治癒。縱然使用像α粒子這種高能量轉移的輻射亦然。其原因乃在於，像α粒子這種高能量轉移的劑量，無法由現今使用的劑量學正確的估算。因此，導致臨床上對這於將這種高效能的輻射，用之於治療肝癌產生卻步，因而無法有效的予以治癒。另外，美國的Lama Linda University為全球輻射治療的先驅之一。他們是第一個在University Hospital建置質子加速器進行質子輻射治療的大學。有鑑於奈米劑量研究的重要性，他們在兩年前即結合了美國西岸四個大學/研究單位(LLU, WIS, UCSD, UCSC) 的物理、化學、生物醫學領域的研究人員，啟動了一個五年研究計畫，進行奈米劑量之研究。值得一提的是該研究計畫使用的仍然是傳統的微劑量的縮小化(Scale Down)，而沒有用到單分子操控術。所以，我們若能得到支助，趕快開始此一研究，我們在這方面的突破與領先仍是可期的。另外，值得一提的是，若將來以輻射照射處理奈米元件或是將奈米元件送到外太空等，輻射在奈米尺度的作用機制的了解都將提供很有用的知識。 如前所述，奈米劑量本身即為一非常前衍的研究領域。而該研究的主要困難之一為實驗的驗証。目前尚無以奈米技術進行這類實驗的文獻報告。本研究計畫針對此一極為前衍之問題，結合了奈米生技之單分子操控術，提出了一完全創新的奈米劑量實驗研究：利用光鑷子操控單一的雙鏈DNA分子，並結合分子影像技術中輻射藥物分子的輸送與標誌DNA分子(子計畫5)，來達到奈米劑量的施予。在這些施放能量作用有效尺度為奈米等級(正好是雙鏈DNA的橫向尺度等級)的放射性分子的作用下，DNA的單鏈斷裂或是雙鏈斷裂則由光鑷子拉力之改變量測得到(子計畫1)。配合實驗，國內劑量學的權威董教授將進行奈米劑量的理論推導與模型建構(子計畫2)，DNA拉力行為的模擬研究(子計畫3)亦包含在計劃中。經過理論與實驗的相互引導、印證，應能對此一主題有較全面性的了解。由於以單分子技術進行這樣的實驗是完全創新的，所以除了與理論預期結果的對照之外，我們亦將進行一些多分子與細胞層級的生化實驗來對部份單分子的實驗結果，進行驗証(子計畫4)。更進一步，利用奈米劑量實驗技術的發展，我們將研究其應用於特定基因分子輻射治療之可能性。由於有臨床醫師的參與，這樣的應用研究將更為實際。單分子的實驗數據經常隱藏在大量的雜訊之中。因此，在本研究中的實驗數據分析與影像分析將因為有統計與影像的專長人員的參與(子計畫6)而得到很大的助益。各子計畫之間的關聯性及相互支援的密切關係，請參閱位於英文摘要的示意圖。另外，各計畫時程上的相互支援關係及檢測點(Checking points)，則請參閱A4. Project Description末之圖示。 在西元2000年4月美國國衛院NIH(NIGMS)舉行了一個有關單分子偵測與操控的研討會。會中大家覺得，這一領域的奈米生技／生醫非常重要 (http://www.nigms.nih. gov/news/meetings/single_molecules.html#content)。因此，在西元2001年2