鼠胚体外发生试验及IVF实验室装修材料的影响（可编辑）.docVIP

鼠胚体外发生试验及IVF实验室装修材料的影响 硕士学位论文 鼠胚体外发生试验及 IVF 实验室装修材料的影响 姓名：朱晓芳 申请学位级别：硕士 专业：@ 指导教师：闻安民;张仁礼 2010 硕士学位论文 鼠胚体外发生试验及 IVF 实验室 装修材料的影响 研究生:朱晓芳 摘 要 人类体外受精-胚胎移植 （ In-vitro fertilization and embryo transfer ，IVF-ET ） 的受精率、卵裂率、囊胚形成率及临床妊娠率低下一直困扰着该领域研究者。IVF 实验室的化学污染问题被认为是主要原因之一。化学污染主要来源于挥发性有机 化合物（Volatile Organic Compounds ，VOCs ）的排放。VOCs 主要由 IVF 实验室 器材、墙壁涂料、胶剂、地板及层流设备材料等排放。在 IVF 实验室装修时，尽 量减少化工材料的使用，选择排放VOCs 低的设备及材料，可以最大程度优化IVF 实验室环境。配子或胚胎的冷冻/解冻方法及辅助孵出方法也会影响到受精率、 卵裂率、囊胚形成率及临床妊娠率。玻璃化冷冻/解冻及激光辅助孵出技术与其 它冻存方法和辅助孵出方法比较更有优越性。为验证 IVF 实验室装修后的环境质 量及玻璃化冷冻、激光辅助孵出技术对受精率、卵裂率、囊胚形成率的影响，分 别在 IVF 实验室建立 3 个月和建立 1 年后进行了一系列的鼠胚试验，包括小鼠超 排、配子与胚胎体外发生试验、鼠胚玻璃化冷冻、解冻及辅助孵出等试验。试验 所获得的受精率、卵裂率、优质胚胎率、囊胚率及囊胚孵出率与各文献报道结果 一致，甚至优于文献报道结果。装修 3 个月和 1 年后鼠胚试验结果相比较，未发 现明显差异，P ＞0.05 。此结果提示 VOCs 排放的减少，玻璃化冻融及激光辅助 孵出技术的应用，可以提高受精率、卵裂率、优质胚胎率、芭呗始芭咛シ醭雎剩 I 鼠胚体外发生试验及IVF 实验室装修材料的应用 对 IVF-ET 临床结局意义重大。 研究目的: 验证通过改善 IVF 实验室的装修材料可以有效减少 VOCs 的释放， 为配子及胚胎提供更加安全无毒的培养环境，有利于配子及胚胎的体外发育；观 察玻璃化冷冻/解冻及激光辅助孵出技术对胚胎冻存和孵出效果。 研究方法: 本研究包括以下几部分: 1．小鼠超排卵及配子与胚胎的体外发生：第一天下午 5:00 给雌鼠腹腔注射孕 马血清促性腺激素（PMSG ）10IU/只（0.1ml ）,第三天下午 5：00 注射促 性腺激素（HCG ）10IU/只（0.1ml ）。雌鼠注射HCG 12~13h 后人性化处死 雄鼠，获得精子并使之获能。注射 HCG 13~14h 后，人性化处死雌鼠，获 得卵子。将获能精子加入培养箱中放有卵子的培养皿中。加精 4-6 小时后观 察受精情况，后每 24h 观察卵裂率、囊胚形成率。 2 ．8 细胞期鼠胚（d2.5 ）的获得：第一天 12：00 给雌鼠腹腔注射 PMSG 10IU/ 只（0.1ml ）。第三天中午 11：00 给雌鼠腹腔注射 HCG 10IU/ 只（0.1ml ）。 注射 HCG 当日下午 5：00 一对一与公鼠合笼。次晨检查阴道栓子情况，见 栓记为受精 d0.5 。第六天上午人性化处死雌鼠，获得d2.5 鼠胚。 3 ． 玻璃化冷冻：将 d2.5 鼠胚移入玻璃化冷冻液 1 液约 5~7 分钟，后移入玻璃 化冷冻液 2 液，随后装载到冷冻载杆上，将载杆投入液氮。 4 ．玻璃化解冻：30