[生物学]第一章 核酸的结构.docVIP

第一章 核酸的结构 第一节 核酸的化学组成 1.DNA和RNA都是由一个一个核苷酸(nucleotide)头尾相连而形成的。单个核苷酸是由含氮有机碱(称碱基)、戊糖和磷酸三部分构成的。 区别：RNA平均长度大约为2000个核苷酸，而DNA一般很长 。RNA多为单链， DNA多为双链 2.嘌呤（purine）：双环结构 腺嘌呤（adenine , A）；鸟嘌呤（guanine, G） 嘧啶（pyrimidine）：单环结构 胞嘧啶（cytosine, C）；尿嘧啶（uracil, U）--RNA特有；胸腺嘧啶（thymine, T）。 3.碱基共价结合于戊糖的1’位构成核苷；核糖与碱基的结合位置嘧啶为1位，嘌呤为9位；碱基与戊糖的之间的结合键成为糖苷键。 4. 核苷酸由一个或多个磷酸分子共价结合于核苷的核糖的3’、5’位或2’位（核糖核苷中）而成。 第二节 DNA的结构 1.DNA的一级结构是指DNA分子中核苷酸的排列顺序，也称 DNA序列。 2.核苷酸之间的差异仅仅是碱基的不同，也称为碱基顺序。 3.DNA分子中不同排列顺序的DNA区段构成特定的功能单位，这就是基因。基因的功能取决于DNA的一级结构。 4.核苷酸的连接方式——3’，5’－磷酸二酯键：核苷酸糖基上的3＇位羟基与相邻核苷酸的5＇磷酸残基之间，形成的酯键。 5.中性条件下，每一个磷酸基团带有一个单位负电荷，因而核酸是“酸”，而且是强酸的阴离子，是一种带有强负电性的多聚体 6.寡核苷酸一般是指二至十个核苷酸残基以磷酸二酯键连接而成的线性多核苷酸片段。目前可由仪器自动合成，它可作为DNA合成的引物（primer)、基因探针（probe)等，在现代分子生物学研究中具有广泛的用途。 7.Watson、Crick于1953年提出模型——DNA的双螺旋 1）带有负电的磷酸－戊糖骨架在分子外侧； 2）碱基平面堆积于螺旋内部； 3）由于骨架双链在螺旋轴上的间距不相等，因而在分子表面形成宽窄不等的大沟和小沟； 4）双链之间对应的碱基以氢键作用形成碱基对； 5）DNA双螺旋结构中每一匝螺旋含有约10个碱基对； 6）两条链以5’ 3’方向，反向平行排列； 7）碱基配对原则 ：G-C 三个氢键； A-T 二个氢键； 8）两条链互为互补链（complementary strand）。 8.B 型DNA双螺旋结构参数： 1）螺旋直径2nm； 2）螺旋周期包含10对碱基； 3）螺距3.4nm； 4）相邻碱基对平面的间距0.34nm； 5）具有大沟和小沟。大沟含有丰富的遗传信息，有很多氢键受体和供体，暴露基团的特有模式使蛋白质能准确识别DNA 序列。 9.生物体内DNA结构基本接近于B型螺旋（最稳定），在低温条件下，DNA分子可以被诱导形成A型，螺旋结构更加紧密、更宽，螺旋重复每匝为11个碱基对，这一构象不仅出现于脱水DNA中，还出现在RNA分子中的双螺旋区域和DNA-RNA杂交分子中；左旋DNA为Z型DNA，属于异常螺旋形式，外观呈Z字型，每匝12碱基对，不是体内DNA的主要形式，重复单位是二核苷酸，只有一个螺旋沟，相当于B构象中的小沟，狭而深。 第三节 核酸的性质 1.核酸的紫外吸收：由于嘧啶碱和嘌呤碱均含有苯环，因此在紫外区均有吸收，DNA和RNA—260nm（蛋白质—280nm ；苯酚—320nm）。 2.核酸的减色性：其吸光值顺序以此为：单核苷酸单链DNA（RNA）双链DNA（RNA），引起减色性的原因为：碱基在疏水环境中的堆积。 3.核酸的纯度检测： 1）纯的dsDNA的A260／A280为1.8； 2）纯RNA的A260／A280为2.0； 3）若DNA样品的A260／A2801.8，则表明有RNA污染； 4）若DNA样品的A260／A2801.8，则表明有蛋白污染； 5）若RNA样品的A260／A2802.0，则表明有蛋白污染； 6）若RNA样品的A260／A2301.8，则表明有 EDTA 、多糖、酚类、肽、盐酸等其他杂质污染（正常值为2.0-2.2）。 4.核酸分子变性： 1）变性条件：加热, 极端pH, 尿素, 酰胺 ； 2）变性过程的表现：S.S. DNA粘度降低；S.S.DNA 沉降速度加快；S.S.DNA分子的A260nm UV 值上升。 3）Tm：OD增加值的中点温度(一般为85-95℃)，即使DNA双链分开的温度范围的中点。（Tm = 69.3 + 0.41 × GC%；Tm = 4*(G+C) + 2*(A+T)。） 4）增色效应的跳跃现象：高分子量的DNA分子在热变性过程中, 富含AT区域首先发生变性, 然后逐步扩展, 表现增色效应的跳跃现象, 使变形过程加快。 5.核酸分子的复性： 1）复性