[农学]第2章核型与染色体显带.pptVIP

第二章 核型与染色体显带Karyotype and bands Karyotype preparation Q带：喹丫因染色后，紫外照射下的明暗带（富含AT的明带，富含GC的暗带）； G带：Giemsa染料染色后所呈现的染色体区带；（AT区是深色） R带：是中期染色体经碱性磷酸盐处理，丫啶橙或Giemsa染色后所呈现的带型，一般与G带正好相反； C带：显示着丝粒结构异染色质及其它染色体区段的异染色质。 T带：是染色体端粒部位经丫啶橙染色后呈现的区带； N带：Ag-As染色，主要染核仁组织者区域的酸性蛋白。 1975年建立了染色体高分辨显带技术。 染色体微切割和分子克隆技术。 BSG（氢氧化钡/盐/Giemsa）方法被认为是标准的C显带方法 C显带的机制可能再蛋白而不是DNA 在C带上的蛋白可能对Giemsa有更强的亲和性 染色体显带技术的应用 1，染色体变异 2，基因定位 传统核型分析技术的优势和缺点 优势 可观察到基因组的全部染色体 适合于当怀疑有染色体异常，可作为一般的染色体异常的检测工具。 缺点 只能检测较大的结构异常 ( one band = 6mb of DNA ~ 150 genes ). 需要大量的劳动并高度依赖操作者的经验和技术 二、荧光原位杂交Fluorescence in situ hybridization (FISH) 可以提高染色体分析的敏感性，特异性和精度 Increased the sensitivity , specificity ,and resolution of chromosome analysis. 荧光标记的DNA探针约40kb，用于检测基因和染色体的异常其精度是常规遗传学无法比的。Fluorescently labeled DNA probe ~40 kb.to detect or confirm gene or chromosome abnormalities that are beyond the resolution of routine cytogenetics. Metaphase FISH Interphase FISH 荧光原位杂交（Fluorescence?in?situ?hybridization?FISH）在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。 应用：动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组进化研究待许多领域。 原理：用已知的标记的单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行特异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。 优点：快速、检测信号强、杂交特异性高和可以多重染色。  探针的荧光素标记可以采用直接和间接标记的方法。 间接标记是采用生物素标记DNA探针，杂交之后用藕联有荧光素亲和素或者链霉素亲和素进行检测，同时还可以利用亲和素-生物素-荧光素复合物，将荧光信号进行放大，从而可以检测500bp的片段。 而直接标记法是将荧光素直接与探针核苷酸或磷酸戊糖骨架共价结合，或在缺口平移法标记探针时将荧光素核苷三磷酸掺入。直接标记法在检测时步骤简单，但由于不能进行信号放大，因此灵敏度不如间接标记的方法。 FISH的应用 用于微缺失综合症的检测 三染色体检测和性别决定 癌症检测 Single Gene Probes( deletion or amplification) P58 CLK-1 Locus (1p36). D7S486 (7q31). Retinoblastoma (13q14). P53 (17p13.1). Her-2/ neu (17q11.2-q12). 染色体（不同颜色的探针） FISH的优点 精度更好(L ~ 2mb). 可应用于分裂和不分裂期的细胞 技术简单 多探针杂交，可检测易位 可以鉴定一系列突变 FISH的缺点 不能检测小的突变 不能检测单亲二倍体 不能检测倒位 整个染色体区域的探针还不能商业化 光谱核型分析和多色FISH Spectral Karyotyping (SKY) and Multiple Fluorescence In Situ Hybridization(M-FISH) 多色FISH Multiple Fluorescence In Situ Hybridization(M-FISH) FISH一个最大的特点是可利用不同颜色的荧光素标记不同的探针，同时对一张制片进行杂交，从而对不同的靶DNA 同时进行定位分析。但是，由于不同荧光素之间的光谱重叠，一般只限于同时用三种不同颜色进行标记。 解