用纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用课件.pptVIP

Attentions(注意) 1.手洗净，滤纸勿污染，滤纸勿折， 2.点样分配标记用铅笔（1.2.3.4）， 3.点样点直径 0.4cm，1、3（点3次：干后重复 ）； 2、4（点1次），点样的吸管勿串用，用毕放回原处。 4. 用牙签穿洞，做滤纸芯 5.层析结束，铅笔先标出酚的前沿再烘干。（做记号） 6.喷茚三酮时（不要对着人喷），前沿以内，喷均匀，。 7.烘干后出现色班，铅笔圈下各色班。 8.点样原点不是滤纸的圆心。 9.层析剂是强腐蚀剂，勿触及皮肤、衣服。 * * Identification of the transamination by paper chromatography Exp.9 用纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用 Purpose(目的) 1.To master the principle of transamination 掌握转氨基作用原理 2.Identify the transamination by paper chromatography 用纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用 Principle（原理） 1、 transamination R 2 C COOH NH 2 H 1 R C COOH O R 2 C COOH O R 1 C COOH NH 2 H amino acid α-keto acid amino acid α- keto acid aminopherase two important aminopherases GPT（acute hepatitis） GOT（myocardial infarction） （两种重要的转氨酶） Reaction - this experiment COOH CH2 CH2 C O COOH + CH3 CH-NH2 COOH GPT COOH CH2 CH2 CH-NH2 COOH + CH3 C O COOH 2、the paper chromatography（纸层析） Ala, low-pole Glu, high-pole The stationary phase : Fibrin combine water phenol , low-pole The flowing phase: （固定相） （流动相） Xs Ym The foreland of solvent The center of the speckle The center α↑ Rf↓ ;α ↓ ，Rf ↑ coefficient of distribution α= Cs/Cm Cs：固定相中的浓度 Cm：流动相中的浓度 （分配系数：α ） Rf=Xs/Ym Xs：溶质移动的距离 Ym：溶剂移动的距离 transport ratio （迁移率） The influencing factor on Rf ： The structure and character of the AA The Solvent system Temperature The quality of the filter paper （影响因素 ） 3、Color：(显色) OH OH O O 2 水合茚三酮 + H2N-CH-COOH R ONH4 O N O O +RCHO+CO2 罗曼氏紫 Operation(操作) 1、 The enzymatic reaction(酶促反应) 1 2 100℃，5mins add 0.5ml Ala 0.5ml a–ketoglutarate 1.5ml buffer Mix up 37 ℃, 1hr 1 100 ℃ 10mincool 2 3000rpm 5mins supernatant 肝匀浆 （两种：已备好） （ 上清液） 2、 Chromatogram(层析) ①Don’t touch the filter paper by hand ②Mark with pencil , hole with toothpick ③ Spotting the sample(点样) ④ Chromatogram(层析) ⑤ Drying