高效液相色谱法测定淀粉类食品中丙烯酰胺研究.docVIP

高效液相色谱法测定淀粉类食品中丙烯酰胺研究 2002 年4 月,瑞典斯德哥尔摩大学的Margareta Tornqvist 教授首次在油炸及焙烤的马铃薯和谷物类食品中发现了具有神经毒性的潜在致癌物- 丙烯酰胺(Acrylamide) ,这是国际上首次从食品中检出高含量的丙烯酰胺[1 ] 。这次在食品中检出足以对人体健康产生危害的量,引起了包括世界卫生组织等国际机构的重视。世界卫生组织在瑞士日内瓦召开关于丙烯酰胺专家会议,专门商讨食物中丙烯酰胺问题的重要性。食品中丙烯酰胺的产生机理,目前基本得到确认的是由食品中天门冬酰胺和还原性糖在高温加热过程中通过美拉德反应(Maillard reaction) 而生成,食品加热到120 ℃以上即可发现丙烯酰胺的生成,加工方式对丙烯酰胺的产生影响很大[2 ,3 ] 。由于丙烯酰胺已被WHO 国际癌症研究中心( IRAC) 列为可能致癌物质[4 ] ,动物实验和体外细胞实验都证明丙烯酰胺可导致遗传物质的改变和癌症的发生[5 ] 。因此该研究目前已引起包括欧盟、FAO、WHO 等政府和国际组织的广泛关注。但这些研究均处于刚起步阶段。在我国,到目前为止,仅见有关食品中丙烯酰胺的新闻报道,具体的研究还是空白。食品中丙烯酰胺的检验已列为我国“十五”国家重大科技专项“食品安全关键技术”课题,卫生部食品安全计划也将食品中丙烯酰胺检测方法的建立和我国食品丙烯酰胺分布调查作为一个重要部分。目前,国际上食品中丙烯酰胺测定方法主要为气相色谱- 质谱联用法和高效液相色谱- 质谱联用法两种方法,对仪器设备要求较高。本文在查阅文献[6 - 8 ]的基础上建立了食品中痕量丙烯酰胺的高效液相色谱测定法,采用固相萃取法对样品进行净化,该法简单、快速、灵敏、准确,适合批量检测。通过对实际样品进行检验,取得了令人满意的效果。现报告如下: 1 　实验部分 1. 1 　本岛津LC - 10A 高效液相色谱仪,配二极管阵列检测器;离心沉淀机,0～5000r/ min ;0. 45μm水系针筒式微孔滤膜过滤器;Milli - Q plus 超纯水系统(美国密理博公司) ;丙烯酰胺标准,纯度大于99 %(美国Sigma 公司) 。丙烯酰胺储备液浓度为1000mg/L 甲醇溶液,存放于- 20 ℃冰箱中,丙烯酰胺标准应用液浓度为1. 0mg/ L 的水溶液(临用新配) ;LC - C18 PK/ 54 固相萃取小柱(美国Supelco 公司) 。试剂除注明外均为分析纯。试验用水为二次蒸馏超纯水。 1. 2 　色谱条件　色谱柱:美国Aglient 公司Aglient XDB 反相C18柱,20cm×4. 6mm i. d. ,5μm;流动相甲醇:水(体积比为5 :95) ,流速0. 8ml/ min ;柱温40 ℃;检测波长210nm;光谱扫描波 长190nm～370nm;进样体积5μl 。 1. 3 　样品处理　称取均质化食品样品约2. 00g 于20ml 塑料离心管中,加水至10ml ,旋涡振荡20min ,4000r/ min 离心20min ,取上清液(避开油层) 5ml 经0. 45μm 水系针筒式微孔滤膜过滤器过滤后,取1. 5ml 滤液过事先用甲醇和水处理过的SPE 小柱,弃去最初0. 5ml 流出液,收集流出液进样测定。 2 　结果与讨论 2. 1 　仪器条件的选择　比较了几种流动相,分别为甲醇、甲醇:水(10 :90) 、甲醇:水(5 :95) 甲醇:乙酸:水(0. 5 :0. 1 :99. 4) ,发现甲醇:水(5 :95) 条件下丙烯酰胺和样品中干扰物能达到较好基线分离;在0. 2ml/ min～2. 0ml/ min 范围内改变流动相流速,发现在流速为0. 6ml/ min～1. 20ml/ min 丙烯酰胺出峰时间合适,峰形较好;对丙烯酰胺标准溶液用紫外光谱仪进行扫描,其在210nm处有个最大吸收峰(图3) ;进样量大可提高测定的灵敏度,但实验中发现,当进样量达到10μl 以上时,峰形将发生分散、拖尾等现象。综合考虑,我们确定测定的色谱条件为:流动相为甲醇:水(5 :95) ,流速0. 80ml/ min ,柱温40 ℃,检测波长210nm;进样量为5μl ,测定结果令人满意。此条件下丙烯酰胺的保留时间为4. 95min ,标准及样品色谱图分别见图1和图2。 2. 2 　萃取条件确定　比较了活性炭和C18固相萃取小柱等几种萃取吸附剂。发现活性炭吸附剂对强极性丙烯酰胺有很好的保留特性,对样品中待测物有较大的浓缩作用,但由于其对食品样品中所有成份均有吸附作用,因此对样品中共存的干扰物质分离效果较差;固相萃取小柱对丙烯酰胺基本无吸附,而对样品液中共存物质有较好的保留,可有效地除去样品液中蛋白质等干扰物质,缺点是对样品液中待测