大叶栎ISSR扩增体系的优化.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiA ．Sci．2009，37(22)：10424—10425，14028 责任编辑 罗芸 责任校对 施倩倩 大叶栎 ISSR扩增体系的优化 梁文汇 ，谭健晖 ，黄寿先 ，梁机 ，谢素平 ，刘光金 ，黄婷 ，周传明 (1．广西大学林学院，国家林业局中南速生材繁育重点实验室，广西南宁530004；2．广西林业科学研究院，广西南宁530001) 摘要 [目的]探讨影响大叶栎ISSR扩增效果的因素，建立大叶栎ISSR扩增的优化体系。[方法]以新嫩的大叶栎叶片为试材，采用改 良CTAB法提取大叶栎叶片基 因组DNA，并将DNA浓度稀释到30ng／ ，采用单因素试验设计测试DNA模板、PCR缓冲液和 raqDNA 聚合酶的用量以及底物dNTP终浓度和引物终浓度对ISSR扩增的影响。[结果]大叶栎的ISSR扩增的最优反应体系为：总体积20 l 中含有DNA模板6ong、PCR缓冲液 10xbuffer为2．0 l，底物dNTP终浓度为0．25mmol／L，引物终浓度为0．3t~mol／L，raqDNA聚合酶 为 1u。在该体系下，能够扩增 出清晰、多态性高的条带，能够满足大叶栎种群 ISSR多样性分析的要求。l结论]建立了大叶栎 ISSR扩 增的优化体 系，为研究广西的大叶栎种群遗传多样性提供 了技术基础。 关键词 大叶栎；ISSR；反应体 系；优化 中图分类号 S792．18 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2009)22—14024—02 OptimizationofISSRAmplificationSystem ofCastanopsisfissa LL Wen-huietal (CollegeofForestry，GuangxiUniversity，KeyLaboratoryofFast．growingTreeBreedinginCentralSouthChinaof StateForestryAdministration．Nanning．Guangxi53OO04) Abstract 0『biective1Thestudyaimedtodiscussfactors血ataffectedISSRamplificationeffeetofCastanopsis suandestablishoptimized systemofIssRalnplificationforC． sa．1Method1withtenderleavesofC． saastestedmaterials，genomicDNAofC． sawasextracted withmodifiedCTABmethodandtheDNAconc．wasdilutedto30ng／uJ．Single．factorexperimentwasdesignedtotesttheeffectofthedosa— gesofDNA template．PCRbufferandTaqDNApolymerase。aswellasthefinalcone．ofsubstratedNTPandprimers0nISSRamplification． R『esultl eoptimizedsystemofISSRamplificationofrC． 3awasasofllows：thetotal20 lreactionvolumecontainedDNAtemplateof60 ng，PCRbu r10×bufferof2．0 “l，thefina1substratedNTPconc．was0．25~mol／L，thefinalprimerconc．was0．3wmol／LandTaqpol— ymerasedosagewas1U．Inthesystem．theclearbandswithhighpolymorphism couldbeamplified．whichcouldmeettherequirementsofIS— SRdiversityanalysisforC．fissa． C『onclusionlTheoptimizedsystemofISSRamplificationforC． setwasestablishedandprovidedthetech— nicalfoundationofrstudyingthepopulation geneticdiversityofC． sapopulationinGuangxiProvince． Keywords Castanops