导学案(微生物的实验室培养).docVIP

课题1 微生物的实验室培养 【学习目标】 说出培养基的类型、用途和基本成分。 举例说明常用的消毒与灭菌方法。 阐明培养基配制的方法和接种的方法。 重难培养基的营养成分、无菌操作的基本方法、配制培养基的基本步骤、常用的微生物的接种方法。 【自主学习】 一 基础知识 （一）培养基 1.概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养物质。 2.分类方式 分类标准 类型 备注 培养基的 培养基、 培养基和半固体培养基 培养基中加入凝固剂（有琼脂、明胶、硅胶等）即为 培养基。 培养基是实验室中最常用的培养基之一。 微生物的种类 细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养 培养基的特殊用途 基础培养基、加富培养基、选择 培养基和鉴别培养基 选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 鉴别培养基：是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物。如鉴别大肠杆菌的培养基，鉴别纤维素分解菌的培养基。 培养基的化学成分包括 四类营养成分。除此之外， 培养基还要满足微生物生长对 、特殊营养物质以及 的要求。 4.E.coli指 。 （二）无菌技术 1.关键 防止 的入侵。围绕如何避免杂菌的污染展开。 2. 无菌技术包括： （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 ； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 旁进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与 相接触。 3.比较消毒和灭菌 消毒 灭菌 概念 用较 的物理或化 学方法杀死物体 的部分微生物（不包括芽孢和孢子） 用较 的理化因素杀死物体 微生物（包括芽孢和孢子） 常用方法 消毒法（ 消毒法） 消毒法、紫外线消毒法 灼烧灭菌、 灭菌、 灭菌 适用对象 操作空间、液体、双手等 接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等 二 实验操作（大肠杆菌的纯化培养） （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算：根据 比例，计算100mL培养基各成分用量。 2.称量：牛肉膏较黏稠，可用玻棒挑取，同 一同称量。称取牛肉膏和蛋白 胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。 溶化：加水加热熔化牛肉膏与称量纸→取出称量纸→加入蛋白胨和氯化钠继续加热→加入 →用蒸馏水定容到100mL（整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂）。 4.灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用 灭菌锅灭菌； 所用培养皿用报纸包扎后用 箱灭菌。 5.倒平板：待培养基冷却至 左右时在 附近操作进行。 其过程是： ①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞； ②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰； ③左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。 ④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。 （二）纯化大肠杆菌 1.方法：微生物接种的最常用方法是和 （1）平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐 步稀释分散到培养基表面。其操作步骤是： ①将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红。 ②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。 ③将菌种试管口通过火焰达到的目的。 ④将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种。 ⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。 ⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环伸入平板内划3～5条平行线，盖上皿盖，不要划破 培养基。 ⑦接种环，冷却后从第一区划线末端开始向第二区域内划线。重复 上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将第五区的划线与第一区划线相连。 ⑧将平板倒置放在培养箱中培养。 稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼 脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。 ①取盛有9mL水的无菌试管6支，编号101、102、103、104、105、106。 ②用灼烧冷却的移液管吸取1mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次，使之混匀。 ③从101倍液中吸取1mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依 此类推。 培养：将接种后的培养基和一个 的培养基