番茄组织培养的现状与进展.docVIP

番茄组织培养的现状与存在的问题 姓名：罗小燕 学号：071424114 分数： 番茄营养丰富，风味香郁，深受人们的喜爱，在世界各地被广泛种植，成为各国的主要蔬菜作物之一。由于它是典型的双子叶植物，具有自花授粉、染色体图谱较清楚、较易栽培等优点，成为生物学领域研究最多的模式植物之一。作为各国实验室植物转基因工作的基础，番茄再生系统的建立至关主要，它是遗传转化成功的前提和保障。但在组织培养过程中，常会遇到一些问题，如污染、褐变、玻璃化等，这都使得试验无法进行下去，甚至导致整个试验的失败，给科研和生产造成损失。在总结相关文献的基础上，并依据在番茄组织培养方面的研究体会，先从这些问题的发生原因及控制措施等方面进行分析探讨。 组织培养技术自开发以来，在很长一段时间内，生物学家们都注重于研究组培苗的内部生理研究机制，寻找促成器官形成的激素，完善培养基的营养配比，以及探索不同的离体培养途径和组织培养技术，但很少研究由于组培过程中特殊的生长环境对组培苗生长造成的生理影响，对在组培过程中实施微生态环境调控也不够重视。直到20世纪70年代末至80年代初，才开始有学者提出改善组培苗生长环境的观点，而真正引起普遍重视和实质性研究则是80年代以后。传统组培环境引发的问题和缺陷有以下几个方面：（1）繁殖周期不稳定，生产计划难以安排；（2）组培苗之间的生长差异大，成品苗个体不能达到均匀一致；（3）驯化阶段苗的成活率低、管理和操作以及不利于组培苗生产的规模化和商品化。此外，由于传统的组培容器小，且密封要求严格，造成对环境因子的测量和调控十分困难。而植物组织培养新技术一高品质试管苗和规模化生产为目的，采用波长固定、光强可调的发光二级管作为光源，采用具有高透气性、低透湿性、耐高温、易于加工成型的聚四氟乙烯脂膜制成的培养容器，岩棉块作为培养基支持体，外施CO2 替代蔗糖作为试管苗生长所需碳源。 外植体的褐变是番茄组织培养中常见的现象。它是由于组织中的酚类物质经氧化后产生棕褐色的醌类物质造成的这类物质可抑制细胞中其它酶的活性,影响细胞的正常代谢严重时可导致组织的死亡。褐变的发生与外植体组织中所含的酚类化合物多少和多酚氧化酶活性有直接关系。很多植物,特别是木本植物都有高含量的酚类化合物,番茄是含酚类物质较多的蔬菜,这些酚类化合物在完整的组织和细胞中与多酚氧化酶分离存在,因而比较稳定。在切割外植体时,切口附近的细胞受到伤害,其分离效应被打破,酚类化合物外溢。酚类物质很不稳定,在溢出过程中与多酚氧化酶接触,迅速氧化成褐色的醌类物质和水,醌类又会在酪氨酸酶等酶的作用下与外植体组织中的蛋白质发生聚合,进一步引起其它酶系统失活,从而导致组织代谢活动紊乱,生长停滞,最终衰老死亡。褐变的产生受诸多因素的影响。首先要选择适宜的外植体,所选材料的苗龄、取材部位、材料的大小及外植体受伤害程度等均能对褐变产生影响。一般幼龄材料接种后褐变很轻,随着苗龄增长,褐变逐渐加重,试验发现苗龄较长的子叶和高度分化的真叶容易褐变。试验观察一般选7 d～9 d(天)苗龄的番茄子叶较为适宜。外植体的大小也十分重要,如果过小很容易发生褐变。子叶的大小应该不小于0.5 cm×0.5cm(厘米),小于0.5×0.5的子叶褐变严重。下胚轴的适宜长度是0.5 cm～0.7cm(厘米)。外植体的受伤害程度直接影响褐变,切割时应尽可能减少伤口面积,伤口尽可能平整些,并缩短切口暴露在空气中的时间。通过缩短转瓶周期或多次连续转移培养也可减少褐化的发生。接种后转瓶时间长,伤口周围积累醌类物质增多,褐变严重,而缩短转瓶周期可减轻褐变。多次连续转移培养是在外植体接种后1 d～2 d(天)立即转移到新鲜培养基中或同一培养基中不同部位。另外,合适的培养基,在培养基中加入抗氧化剂和活性炭都会有效控制褐化的发生。值得注意的是,用活性炭抑制褐变有一个副作用,即活性炭在吸附有毒酚类的同时,也要吸附培养基中的生长调节剂。 在番茄组织培养过程中污染是经常发生的。造成污染的病原主要分为细菌和真菌两大类。细菌性污染的主要症状是培养材料附近出现粘液状和发酵泡沫状物体,或在材料附近的培养基中出现混浊和云雾状痕迹,一般在接种后1 d～2 d(天)即可发现。播种番茄种子后,在种子周围出现细菌污染,一般是种子消毒不彻底,解决的办法是延长用75%的酒精和10%的次氯酸钠的消毒时间。如果是接种后在外植体周围出现细菌污染,可能的原因是镊子带菌或操作台及操作人员的手未消毒干净。解决的办法是待超净台开启15 min(分钟)后用75%的酒精擦洗台面,再将镊子蘸取酒精后烧红做到彻底消毒,接种时镊子使用一次后(或接完一瓶)即要消毒一次,操作过程中要经常用75%的酒精擦洗手部。真菌性污染主要指霉菌引起的污染,一般接种