周丛照李振刚聂焰高红-遗传.PDFVIP

遗传HEREDITAS(Beijing)18(4):29-311996 异源MAR介导外源基因与家蚕受精卵核基质的体外结合① 周丛照 李振刚 聂 焰 高 红 （中国科学技术大学生物系，合肥 230027) 摘要 以携带人 ft干扰素基因5，上游MAR(MatrixAssociationregions）的质粒 pCL为载体，在其 BamHI位点上正向插人天蚕 A（ntheraearamamai)丝素基因核心区Af6.8而构建成质粒pMAC．通过 质粒pMAC,pAy6.8和pCL与家蚕 B（ombyxmori)受精卵核基质的体外结合及其比较分析发现，在 体外异源MAR能有效地介导外源基因与核基质结合．这为MAR作为真核基因转移、整合和表达的载 体提供了一个初步的实验证据。 关键词 MAR，核基质，体外结合 InvitroAssociationofExogenousGenewiththeNuclearMatrix ofBombyxmoriFertilizedEggsMediatedbyHeterogeneousMAR ZhouCongzhao LiZhengang NieYan GaoHong (DepartmentofBiology,USTC,Hefei230027) AbstractWehaveconstructed aplasmid pMAC by inserting thecoreregion ofAntheraea yamamaifibroingeneintotheBamH1siteoftheplasmidpCLwhichcontainstheMARupstream huIFN-口gene.InvitroassociationofpCL,pAy6.8andpMACwiththenuclearmatrixofBombyx morifertilizedeggsindicatedthatpMACandpCLcouldtightlybindtothenuclearmatrix,butpAy6.8 foundmuchmoreineffectively.ThisprovidesapreliminaryevidenceforMARasavectorforeukaryotic genestranfer,integrationandexpression. Keywords Matrixassociationregions,Nuclearmatrix,invitroassociation 核基质 N（uclearmatrix)是存在于真核生物细胞核中的一种三维网架体系，它不仅参与了真核生物的DNA 复制、RNA合成以及hnRNA的加工，而且与染色体的功能构建、有丝分裂、幽类激素作用、病毒复制和致癌 作用有关 5)〔．DNA与核基质的相互作用是通过MAR(Matrixassociationregions）特异性地结合到核基质上来 完成的，真核生物的染色质被MAR分割成拓扑学限制的功能区域而结合在核基质上②．尽管MAR是真核基 因特有的一种顺式作用元件C（is-actingelement)，但不同于经典的增强子，它并不增强内源基因的表达，只对稳 定整合到宿主细胞染色体上的外源基因表现出明显的增强作用 3)‘．这种转录增强作用与转录的起始点和外源基 因与MAR之间的距离无关，只与该基因的拷贝数及其整合状态有关 (4)． 家蚕(B（ombyxmori)是一种重要的经济昆虫，同时还是研究真核基因表达调控的一种理想模型．由于MAR 与核基质紧密结合的特异性及其对外源基因的转录增强作用，它有可能作为真核基因转移、整合和表达的一种有 效载体 ’（〕．为此，我们将天蚕(A（ntheraeayamamai)丝素基因核心区6.8kb片段Af6.8正向插人质粒pCL的 ①本课题由中国科学技术大学校内青年基金资助． 30 遗 传 HEREDITAS(Beijing)1996 18卷 BamHI位点而构建成质粒pMACAf6.8与pCL中携带的人0干扰素基因5，上游的MAR相连。通过pMAC. pAy6.8和pCL与家蚕受精卵核基质的体外结合及其比较分析，为MAR介导外源基因与核基质的紧密结合提供 初步的