[农学]生物化学课件 转录.ppt

二、RNA聚合酶 定义：以DNA为模板，催化三磷酸核苷 （NTP）聚合形成RNA的酶。 作用特点： DNA为模板 不需引物，两游离NTP或一游离NTP与RNA链聚合. 3-OH与5-P聚合形成磷酸二酯键。 方向：5→3。 一、原核生物的转录过程 依赖Rho (ρ)因子的转录终止 非依赖Rho因子的转录终止 基本转录因子 （TFⅠ，TFⅡ，TFⅢ） 直接或间接参与RNA聚合酶与启动子结合的转录因子 特异转录因子： 特异调节各个基因转录的转录因子，决定该基因的时间，空间特异性表达。 hnRNA剪接简图 三、rRNA的转录后加工 纵列串联基因：可转录的DNA片段与不能转录的间隔区串联组成的基因。（基因间隔） 高度重复序列：间隔区和可转录区可以重复数百个到数千个以上，每重复一次构成一个重复单位，转录一个rRNA，而且每个重复单位转录的rRNA大小基本一致，45S r RNA。 丰富基因：具有高度重复序列的基因，称之。rDNA，5s rRNA基因，组蛋白基因，免疫球蛋白 目前研究最多的核酶是 小分子RNA核酸内切酶家族: 锤头核酶, 发夹核酶,丁肝病毒等. 核酶的发现（Cech和Altman）1989诺贝尔化学奖； 核酶的发现是对传统酶学的挑战； 利用核酶的结构设计合成人工核酶 。 剪接体与剪接图示 5. mRNA的编辑(mRNA editing) mRNA转录后出现核苷酸的替换，插入或缺失，改变DNA模板来源的遗传信息，翻译出氨基酸序列不同的多种蛋白质。 apoB mRNA的编辑 apoB基因: 29个外显子, 14500 bp, 4536aa apoB mRNA编辑蛋白(REPP, 脱氨酶) apoB mRNA第26个外显子第6666位C脱氨→U; 密码:CAA (Gln2153) →UAA(终止密码); 肝细胞: 不表达REPP 4536aa apoB 100 肠上皮细胞: 表达REPP 2152aa apoB 48 人类apo B基因 mRNA（14500个核苷酸） 肝脏 apo B100 （分子量为500 000） 肠道细胞 apo B48 （分子量为240 000） mRNA编辑 RNA编辑的生物学意义： 产生多种表达产物，产生多种生物学效应，产生功能用途的分化，因此也称为分化加工 ( differential RNA processing ) 。 DNA上的基因数要比表达的蛋白质种类少。估计10万个基因，实际3万个基因。 二、tRNA的转录后加工 tRNA前体 RNA pol Ⅲ TGGCNNAGTGC GGTTCGANNCC DNA 目 录 RNAaseP、内切酶 目 录 5’前导序列：RNAaseP 中部内含子：内切酶 tRNA核苷酸转移酶、连接酶 ATP ADP 目 录 碱基修饰 （2）还原反应 如：U ? DHU （3）核苷内的转位反应 如：U ? ψ （4）脱氨反应 如：A ? I 如：A ? Am （1）甲基化 （1） （1） （3） （2） （4） 目 录 rRNA基因（rDNA）的特点: 转录 45S - rRNA 剪接 18S - rRNA 5.8S和28S-rRNA rDNA 内含子 内含子 28S 5.8S 18S 四、核 酶 具有酶促活性的RNA称为核酶。 核酶(ribozyme) 四膜虫rRNA内含子的二级结构 四膜虫rRNA的剪接采用自我剪接（核酶）方式。 rRNA前体（35S）, 内含子（9S）414核苷酸 5′-端核苷酸序列 Ⅰ类内含子的特殊结构 A T P 依赖 Rho因子的转录终止： 具有控制转录终止作用的蛋白质因子。 机制： Rho因子与RNA3’-OH的poly C结合， 抑制聚合酶活性，激活解螺旋活性。 2. 非依赖 Rho因子的转录终止 DNA模板近终止处，有特殊的碱基序列，转录出RNA产物形成特殊的结构终止转录。 发夹结构：反向碱基互补序列 末端PolyU：U:A不稳定. 5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU... 3` 5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU... 3` RNA 5?TTGCAGCCTGACAAATCAGGCTGATGGCTGGTGACTTTTTAGTCACCAGCCTTTTT... 3? DNA UUUU...… UUUU...… 5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGG