[生物学]层析法.ppt

22 层析分离法（第一讲） 概述 特点： （1） 纯化倍数高 （2） 操作规模小，放大困难 （3）?终产品纯化 （4） 适用于价格昂贵的产品 层析分离分类（1） 按溶质分子与固定相相互作用机理 吸附层析（范德华力，氢键，静电力，共价力） 分配层析（溶质在两液相间分配系数不同） 凝胶过滤（分子大小与形状） 实验技术分类 低压（小于0.5 Mpa) 中压 (0.5-5 Mpa) 高压 (5-40 Mpa) 电泳 (溶质在电场中移动） 层析分离分类（2） 根据固定相形状分类 柱层析 纸层析 薄层层析 根据流动相分类 气相层析 液相层析 超临界流体层析 按操作方式分类 迎头法（frontal analysis) 顶替法 （displacement analysis) 洗脱分析（elution analysis) 基本概念 （1）分配系数 溶质在固定相与流动相浓度比值 （2）解离常数 吸附质浓度与吸附剂浓度乘积与吸 附复合物浓度比值 （3）分离因素某一瞬间被吸附溶质量占总量的分数 (4)? 阻滞因子分配层析溶质移动速度与理想流动 相移动速度（距离）比值 (5)?溶出体积 在柱色层分离中，使溶质从柱中流 出时所通过的流动相体积 (6)?分辨率 两峰之间的距离与两峰宽的平均什之比 (7) 理论塔板流动相与固定相平均浓度达传质平衡 时的一段柱高 （8）溶量因子固定相中溶质总量与流动相中溶质总之比 分配系数 Kd = C1/C1 K d为分配系数 C1，C2为两液相中的溶质浓度。 应用条件：温度一定 低浓度 分离度 洗脱容积 理论塔板 思考题 1 想解概念：解离常数，分离因素，阻滞因子，理论塔板高度，洗胶体积，分辨率 2 不同的层析分类方法各有何意义？ 层析分离法（第二讲） 层析介质 要求： （1）不溶于流动相 （2）化学稳定 （3）机械强度 （4）大的表面积 （5）粒度均匀 层析介质种类 无机（氧化铝，硅胶，活性碳） 有机（琼脂糖，纤维素，聚丙烯酰胺） 常用层析介质 氧化铝：（活性氧化铝）它是一种多孔性、高分散度固体 （1）有很大的比表面积，其微孔表面具有吸附性能。 （2）分子式AI2O3简单，空间形态复杂，8种以上的形态 （3）同一形态宏观结构性质如密度、孔隙率、孔径 分布、比表 面积等存在差异 （4）吸附量与含水量关系很大 制备：由氢氧化铝加热脱水得到的。 吸附基团：铝离子 种类： 碱性：由氢氧化铝高温脱水，用于碱性稳定的溶质 酸性：碱性氧化铝经盐酸洗涤，用于在酸性稳定的溶质 中性：碱性氧化铝经水洗后活化制得 应用：有机溶剂中分离天然成分 硅胶 硅胶是由多聚硅酸经分子间脱水而形成的一种多孔性物质 （1）化学组成 SiO2.XH20， （2）属于无定形结构，基本结构质点为Si一O四面体，相互堆 积形成硅胶的骨架。质点间的空间即为硅胶的孔隙。 （3）硅胶中的水以羟基的形式和硅原子相连而覆盖于硅胶表面。 硅胶的分类（常以孔径大小来分）， (1) 特细孔硅胶 (0.8nm以下)。 (2) 细孔硅胶（1.5—2.0nm ) (3) 中孔硅胶 (4.0一5.0nm) (4) 粗孔硅胶 (10.nm以上) 应用：吸附层析剂与分配层析剂 优先吸附极性分子及不饱和的碳氢化合物，用于天然产物分离， 可用在水溶液中或有机溶剂中 琼脂糖 由海洋生物琼脂提取得到的主要成分 （1）中性不带电 （2）水溶性线状多糖 （3）高亲水性，含大量羟基 （4）能制成多孔性凝胶，分离大分子 制备： （1）去除带电琼胶成分 （2）将溶化的琼脂糖采用悬浮,乳化或喷珠的方法制 得珠状介质。 （3）采用交联剂增加介质的机械强度 琼脂糖（2） 介质商品种类 Sepharose 2B, Sepharose 4B, Sepharose 6B。 经过交联而增加机械强度的琼脂糖 Sepharose CL-2B, Sepharose CL-4B, Sepharose CL-6B 应用 水溶液中分离蛋白质 葡聚糖 α-1,6 相连的葡萄糖聚合物，由环氧氯丙烷交联得到珠粒 性质： （1）亲水性比琼脂糖高（羟基数多） （2