[英语]第三章-荧光分析.pptVIP

第二节 影响分子荧光的因素 第三节 荧光光度计及荧光测量 2．荧光光度计与紫外－可见分光光度计区别： （1）两个单色器，分别在样品池前后：激发单色器（第一单色器）、发射单色器（第二单色器） （2）样品池：紫外可见光被吸收（池）、荧光发射（池） （3）激发光源（入射光）与荧光检测器相互垂直放置。可避免入射光或透过光对微弱荧光的干扰。 第四节 分子荧光分析的应用和技术 本章小结 2.化合物的结构与荧光 3.影响分子荧光的外部因素 四、荧光光度计及荧光测量 1．荧光光度计的主要部件： （1）激发光源：紫外可见连续光源，如氙灯（Xe）、溴钨灯。 （2）激发单色器：λA或λex ，激发（吸收）光谱； （3）样品池：既是吸收池又是荧光发射池； （4）荧光发射单色器： λf或λem ，荧光发射光谱； （5）检测器：将微弱荧光信号，转变成电信号； （6）放大、显示系统： 2．荧光光度计与紫外—可见分光光度计的结构区别： （1）两个单色器，分别在样品池前后：激发单色器（第一单色器）、荧光发射单色器（第二单色器） （2）样品池：紫外可见光被吸收（池）、荧光发射（池） （3）激发光源（入射光）与荧光检测器必须相互垂直放置。主要是为了避免入射光或透过光对微弱荧光测量的干扰。 三、分子荧光定量分析方法 1．标准比较法：设Ifs、 Ifx 、 If0 由公式If=kc 四、分子荧光的基本实验技术 1．选择If－Cs标准曲线的线性范围 因分子荧光分析仅适用于稀溶液，溶液的浓度应低于10-6g·L-1，其A＜0.05。因此，通过If－Cs工作曲线，确定工作曲线的线性范围。 2．选择适合的激发波长和荧光发射波长 ①固定λf，得If － λA激发光谱（或吸收 曲线），求得λA或λex 。 ②固定λA ，得If － λf荧光发射光谱（或发射曲线），求得λf或λem。 3．必须扣除空白的荧光发射强度，注意选择适合溶剂。 4．注意散射光波长（瑞利或拉曼散射光）的干扰。 ?f还可表示如下： （1）凡是使分子荧光发射几率增大的因素，都会使分子的?f ↑，If ↑ 。 （2）凡是使外传移（碰撞）几率增大、使分子磷光发射（体系间跨越）几率增大的因素，都会使分子的?f ↓，If ↓ 。 （1）跃迁类型：?* → ?的荧光效率高，体系间跨越的速率常数小，有利于荧光产生。 （2）共轭效应：提高共轭程度有利于增加荧光效率并产生红移。 （3）刚性共平面结构：增大分子共轭程度，降低分子振动，故增加荧光效率。 （4）取代基效应： 芳环上有给电子基，使荧光增强 吸电子基，使荧光强度减弱 重原子（Br和I）引起体系间跨越，使荧光强度减弱。 （1）温度： 温度越高，荧光效率越低，温度越低，荧光效率越高。 （2）溶剂效应： 溶剂极性越大，分子荧光效率越高； 含重原子的溶剂导致体系间跨越，分子荧光效率下降； 与荧光分子形成氢键的溶剂，使分子荧光效率下降。 （3）pH值： 荧光物质为弱酸弱碱，酸度的改变会导致荧光物质分子结构改变，使荧光效率改变。 （4）荧光熄灭剂：荧光熄灭剂的存在会引起荧光分子荧光强度减弱或消失。 发生碰撞而使之失去能量 生成不发光的配位化合物 溴、碘以及溶解氧的存在，实现体系间跨越，转变成三重态。 三、激发光谱和荧光发射光谱 激发光谱：固定荧光发射波长(?em)，改变激发波长（吸收波长，?ex），以激发波长为横坐标、荧光强度（If）为纵坐标绘制关系曲线。 荧光发射光谱：固定激发光波长(?ex)，改变荧光发射波长（?em），以荧光发射波长为横坐标、荧光强度（If）为纵坐标绘制关系曲线。 荧光发射光谱的特点： 荧光光谱的形状与激发波长无关 荧光光谱与激发光谱成镜像关系 三、荧光定量分析基础 2．标准曲线法：制作If－Cs工作曲线，由Ifx求Cx 光源 单色器 ? 样品池 检测器 单色器 ?? 记录仪 It If 二、激发光谱、荧光发射光谱 激发光谱：固定荧光发射波长(?em)，改变激发波长（?ex）， 以激发波长为横坐标、荧光强度（If）为纵坐标绘制关系曲线。 荧光发射光谱：固定激发波长(?ex)，改变发射波长（?em），以发射波长为横坐标，荧光强度（If）为纵坐标绘制关系曲线。 特点： If 400 300 500 ①发射光谱形状与激发波长无关 a b ?/nm 硫酸喹啉的激发光谱和荧光发射光谱 200 250 300 350 400 450 500 荧光激发光谱 荧光发射光谱 蒽的激发光谱和荧光发射光谱 ?/nm If a b c ②发射光谱与激发光谱呈镜像对称关系 三、荧光定量分析基本原理 1. 荧光强度与溶液浓度的关系 I0 It If Ia If= ?f·Ia= ?f ·(I0 －It) It=I0