[医学]分子诊断3.pptVIP

传染性疾病的诊断 病原微生物 病原微生物是指可以侵犯人体，引起感染甚至传染病的微生物，或称病原体。 病原微生物有朊毒体、寄生虫（原虫、蠕虫、医学昆虫）、真菌、细菌、螺旋体、支原体、立克次体、衣原体、病毒 等。 传染性疾病诊断的意义 传染病是人类主要的疾病,近30年的新发传染病中，60%为病毒引起的 保护机体健康、有效治疗 控制疾病流行和蔓延 提高人口质量，优生优育（监控垂直传播的病毒和检测导致胎儿畸形的病毒） 致病微生物的分子诊断策略 完整病原体 核酸 蛋白 在体内留下的痕迹 以病毒为例 标本的采集 根据临床诊断、流行病学分析和病毒的致病性等，确定采集合适的标本 血液——病毒的抗体 脑脊液——神经系统感染 鼻拭子、咽拭子——呼吸道感染 粪便——肠道感染 疱疹液、尿液、眼泪、精液、阴道分泌液等 致病性机制不明的病毒感染，采集多部位的标本 采集标本必须快速、低温，以保证检测的准确性 完整病原体的分离与培养 实验室诊断,流行病学研究 分离病原体——“诊断的金标准”，在诊断病原体中占重要地位 由于病毒是严格的细胞内寄生物，所以，病毒分离必须涉及“活细胞”——细胞、动物和鸡胚 动物接种 是最原始的病毒培养方法：根据病毒种类不同，选择敏感动物及接种部位——嗜神经性病毒（狂犬病毒）接种于小鼠脑内；痘病毒接种于家兔角膜 鸡胚培养 鸡胚对多种病毒敏感：一般采用孵化9～14天的鸡胚，根据病毒种类不同，将病毒标本接种于鸡胚的不同部位——羊膜腔、尿囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等 细胞培养 (cell culture)法 是将离体活组织块或分散的组织细胞加以培养的技术总称，然后加入病毒进行培养、分离鉴定，是病毒分离和培养中最常用、最基本的方法 红细胞吸附 (hemadsorption, HAd) 流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细胞膜上出现了血凝素(HA)，具有吸附脊椎动物 (豚鼠、鸡、猴等) 红细胞的能力，这一现象称红细胞吸附，常用来测定具有HA的粘病毒与副粘病毒的增殖 优点 在选择了正确宿主细胞时，敏感性很高 发现多种不同的病毒 特异性较高 缺点 费时费力，时间3-21天 敏感性的高低受到宿主细胞的影响 有些病毒不能在体外培养，因而会造成假阴性的结果 有些病毒因长时间培养而失去了临床应用价值 完整病原毒的电镜检测 实验室快速诊断方法 重要检测方法之一 依靠病毒的形态来诊断 优点 快速（30分钟—2小时—2天） 发现新病毒 适用于一些难以培养或迄今尚不能培养的病毒 缺点 仪器昂贵，需要专业人员 敏感性低，病毒浓度低时假阳性、假阴性率高 特异性低，一般仅能确定到“科” 不能批量检测 病原体的分子诊断 核酸检测:核酸分子杂交、PCR、生物芯片等 病毒蛋白(抗原)检测：ELISA、化学发光免疫、免疫层析等 抗体：ELISA、化学发光、免疫层析等 临床常用的传染性疾病诊断试剂 优生优育系列：TORCH 肝炎系列：甲、乙、丙、丁、戊、庚型病毒性肝炎 性病系列：梅毒、胞疹病毒、衣原体、支原体、淋病和艾滋 呼吸道传染病系列：流感、SARS等 血液传染病筛查系列 《献血者健康检查要求》对献血者所捐献血液进行严格的初、复检两次检测。 抗体检测的优点有 快速 灵敏 监控机体对病毒的免疫状态 大批量筛查 优生优育系列检测试剂盒 TORCH系列 弓形虫(Toxophasma ） 风疹病毒（Rubella.Virus） 巨细胞病毒（Cytomegalo.Virus） 单纯疱疹病毒I/II（Herpes.Virus） TORCH系列结果分析 结果中的IgM抗体：阳性结果提示近期有感染，结合其他情况，终止妊娠。 结果中的IgG抗体：阳性结果提示过往感染，具有一定的保护性。 乙型肝炎病毒的检测 现状 全球约有3.5亿人感染乙型肝炎病毒，中国有1.2亿人感染，其中每年约有1-2%会出现肝硬化或肝癌而死亡 HBV病毒颗粒感染肝细胞及DNA复制过程 诊断乙肝的指标 生化指标：ALT 免疫学指标：“两对半” 乙肝表面抗原（HBsAg）（携带者指标） 乙肝表面抗体（Anti-HBs） 乙肝e抗原（HBeAg）（活动指标） 乙肝e抗体（Anti-HBe） 乙肝核心抗体（Anti-HBc） 病毒学指标：HBV-DNA 乙肝检测方法： “两对半”：ELISA、化学发光免疫分析 乙肝病毒（HBV)核酸：PCR（实时荧光定量PCR） 丙型肝炎病毒的检测 现状 全球HCV的感染率约为3％，估计约1.7亿人感染了HCV，每年新发丙型肝炎病例约3.5万例。我国血清流行病学调查资料显示，我国一般人群抗HCV阳性率为3.2％，全国感染HCV人数约4000万。