[医药]现代生物技术在动物药分离研究中的应用.docVIP

现代生物技术在动物药分离研究中的应用 陈毓 （江苏畜牧兽医职业技术学院药学系，江苏 泰州 225300） 摘 要 ：动物药是我国医药宝库的重要组成部分，在临床有着广泛的应用，但动物药基础研究薄弱, 研究人才匮乏，导致动物药研究发展缓慢。如何借鉴现代科学技术找到适合动物药研究的新方法和新模式，是动物药发展的关键所在。本文通过查阅文献，综述了现代生物技术如色谱分离技术、电泳技术、蛋白组学技术、DNA分子标记、生物芯片、免疫技术等在动物药化学成分分离、鉴别、质量评价等研究中的应用，以期为动物药研究提供参考。 关键词：生物技术；动物药；分离 动物药是我国医药宝库的重要组成部分，是中药三大来源之一，由于活性强、源广、疗效高而备受历代医药学家的重视和青睐祖国医药学应用动物药防治疾病的历史。 表1 1990~2010年《中国药典》中动物药药材及其制剂收载情况 序号 版本 （年版） 药材+饮片（味） 动物药（味） 比例（%） 单味及成方制剂（种） 含动物药制剂（种） 比例（%） 1 2010 616 53 8.6 869 312 35.9 2 2005 553 51 9.2 570 165 29.0 3 2000 534 47 8.8 458 153 33.4 4 1995 517 42 8.1 398 　 121 30.4 5 1990 509 49 9.6 275 　 87 31.6 动物药研究起步较晚，其系统研究整理工作始于20世纪60年代，基础薄弱，存在较多空白，加之传统动物药研究理论不完善，符合动物药研究特色的方法学尚未建立，如何合理有效的借鉴现代技术手段也不明确[1]。动物药传统研究思路是以中医理论为指导，重点研究临床应用等相关方面，主要包括:本草考证、资源调查、基源鉴定、动物药化学、加工炮制、药效研究、品质评价等[2]，而动物药基础理论研究相对较少，如动物药成分分离纯化研究、效应物质基础研究、药效机理研究、代谢动力学研究等。动物药研究是中药研究领域特有的分支，是具有独特体系的学科，其药用部位为动物的器官、组织或代谢产物，来源、组成、成分与植物药大相径庭，因此采用目前相对较成熟的植物药研究思路去探索动物药的道路是很难走通的。尽管如此，随着生物领域技术的发展，现代生物技术已逐渐广泛应用于动物药化学成分分离、鉴别、质量评价等研究领域，并取得了可喜的进展。 1　生化分离技术 动物药中除了含有氨基酸、核酸、甾醇、生物碱等小分子物质外，还含有大量与生命活动密切相关的蛋白质、多肽、酶等成分，常用动物药中的蛋白质和多肽类成分具有抗凝抗血栓、抗肿瘤、抗炎、免疫调节等功效[3]，这些成分可能正是动物药主要物质基础所在。对于中药动物药的分离纯化方法，不能采用传统中药植物药的研究方法，而应将现代生化分离技术引入动物药的研究，并加以充分利用。生化分离技术主要包括:色谱分离、电泳分离、沉淀分离、膜分离等技术。 1.1　色谱分离技术 色谱分离技术包括凝胶过滤色谱、离子交换色谱、反相色谱、亲和色谱等。对于生物大分子的分离，只使用单一的色谱方法很难将待分离物质完全分离，通常将几种原理不同的色谱技术组合起来以获得理想的纯化效果。Cao等[4]利用凝胶过滤、离子交换、制备型反相色谱法从东亚钳蝎蝎毒中分离纯化了Mar-tentoxin I、Martentoxin、BmK AngM1等多肽。Zhen等[5]利用丙酮分级沉淀、超滤、凝胶过滤色谱等方法从鲨鱼软骨中分离纯化得到一种新型抗血管生成多肽。Guan等[6]利用阳离子交换、凝胶过滤色谱从梅花鹿茸中分离得到具有抗肝纤维化作用的新型多肽。魏金荣等[7]采用一步亲和色谱法分离纯化了白眉蝮蛇蛇毒中的降纤酶，得到的降纤酶纯度高达99%以上。 1.2　电泳技术 电泳技术是一种广泛使用的蛋白质和核酸分离分析技术。凝胶电泳是一种杰出的分析手段,是蛋白质纯化过程中重要的监测手段。通过电泳可以准确简便的比较大量样品,并获得蛋白质图谱。将两种基于不同分离原理的电泳方法进行组合能大大提高分离效果,如双向电泳。目前电泳技术已经广泛应用于动物药的鉴定研究。利用动物药药材中的不同组分具有不同的电荷特性,在同一电场下泳动距离存在差异而实现鉴定。史克莉等[8]利用SDS技术对3种蜂王浆、牛血清蛋白、金钱白花蛇、乌梢蛇、鹿蹄筋、炮制前后的蝎子进行了鉴别分析。 仲昭庆等[9]采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对马鹿、梅花鹿、驼鹿、牛的鞭进行了比较鉴别，为鹿鞭的真伪鉴别提供了依据。李仁茂等[10]利用SDS对梅花鹿筋、羊筋、牛筋等动物筋进行了电泳分析。结果表明，鹿筋与其他种动物筋间存在着显著的电泳图谱差异和明显的鉴别区带。 毛细管电泳可减少电泳扩散,速度快,灵敏度高,分辨率强,在多肽、蛋白质、核酸、手