[化学]4 酶促反应动力学.pptVIP

多底物的酶促反应动力学(续) 2、随机反应机理（random reactions) （1）. 底物A、B与酶结合的顺序是随机的，形成的三元复合物AEB → QEP，产物P、Q的释放顺序也是随机的。 （2）. 限速步骤是AEB → QEP （3）. A与Q相互竞争E上的底物结合部位A，B 与P相互竞争E上的底物结合部位B （4）. 反应的总方向决定于A、B、Q、P的浓度和反应的平衡常数 多底物的酶促反应动力学(续) 3、乒乓反应机理（double-displacement reactions) 先结合第一个底物A，释放第一个产物P，酶的构象发生变化，结合第二个底物B，释放第二个产物Q。 谷丙转氨酶 整个反应历程中只有二元复合物形式，没有三元复合物形式 E (EA)(FP) (F) (FB)(EQ) E A B P Q 乒乓反应 谷丙转氨酶 三、?酶的抑制作用 失活作用(inactivation) :使酶蛋白变性而引起酶活力丧失的作用 ,变性剂对酶的变性作用无选择性. 抑制作用(inhibition) :酶的必需基团化学性质的改变，但酶未变性，而引起酶活力的降低或丧失 抑制与失活之间的关系 (一)、抑制程度的表示方法 其活性降低的程度，一般用反应速度的变化表示。以V0表示无抑制剂时的反应速度，V1表示有抑制剂时的反应速度，酶的抑制程度有以下表示方式： （1）相对活力分数 a = V1/ V0 （2）相对活力百分数 a% = V1/ V0 ×100(%) （3）抑制分数 i= 1- a = 1- V1/ V0 （4）抑制百分数 i% = (1-a) ×100(%) （二）抑制作用的类型 （1）竞争性抑制 （2）非竞争性抑制 （3）反竞争性抑制 不可逆性抑制 (irreversible inhibition) 1、不可逆的抑制作用:不可逆的抑制作用定义：抑制剂与酶的必需基团共价结合，使酶的活性下降，无法用透析、超滤等物理方法除去抑制剂而使酶复活。 2. 可逆的抑制作用: 抑制剂与酶以非共价键结合而引起酶活力降低或丧失，能用物理方法除去抑制剂而使酶复活，抑制作用是可逆的 可逆性抑制 (reversible inhibition) 专一不可逆性抑制 非专一不可逆性抑制 3、可逆的抑制作用和不可逆的抑制作用的鉴定 分类 （1）物理方法：透析、超滤 （2）动力学方法：V-[E] 通过可逆抑制剂的动力学曲线可以区分三种可逆抑制作用 (三) 可逆抑制剂的动力学 1.竞争性抑制(competitive inhibition)： 抑制剂具有与底物类似的结构，竞争酶的活性中心，并与酶形成可逆的酶-抑制剂复合物，阻止底物与酶结合。 按照抑制剂的结构又分为两种情况: A:底物类似物抑制剂(同位抑制) B:别位竞争抑制剂 （2）、竞争性抑制的特点 a. 竞争性抑制剂结构往往和底物结构相似 b. 抑制剂与酶的结合部位与底物与酶的结合部位相同； c. 增加底物浓度可使抑制程度减小；抑制剂浓度越大 则抑制作用越大；抑制剂的抑制作用决定与底物与 抑制剂浓度比值；所以可以通过 增大底物浓度，即提高底物的竞 争能力来消除。 d. 动力学参数： Km值增大， Vm值不变。 双倒数直线 斜率上升 直线交于y轴 (3) 竞争性抑制动力学 竞争性抑制动力学(续) （4）竞争性抑制举例： ① 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制 ②. 另外甲醇中毒可用乙醇治疗 ？ ③ 磺胺药对细菌FH2合成酶的抑制 ④ 过渡态的类似物为竞争性的抑制剂 所谓过渡态底物是指底物和酶结合成中间复合体后被活化的过渡形式，一般用S*表示，由于其能障小，和酶结合就紧密得多。 1. 对于一个酶而言,其过渡态的底物类似物与底 物的物相比较,是更有效的竞争性抑制剂（判断） 2.?酶与过渡态底物类似物的亲和力比酶与底物 的亲和力要（ ）。 3. 低浓度的竞争性抑制剂对 别构酶是激活作用 ？ 竞争性抑制举例(续) 抗通风（抑制尿酸生成） 黄嘌呤，次黄嘌呤 黄嘌呤氧化酶 别嘌呤醇 抗癌作用（抑制核苷酸合成） dUMP （胸苷磷合酶） 5-氟尿嘧啶 （5-FU） 抗白血病 二氢叶酸 二氢叶酸还原酶 氨基蝶呤 临床应用 竞争底物 被抑制的酶 抑制剂 （1） 竞争性的抑制剂可以保护酶的活性中心，其他可逆 抑制剂不能→酶活性中心测定的差式修饰 ⑤. 抗代谢物的抗癌作用 思考 2、非竞争性抑制 （1）、