[医学]第02章核酸.pptVIP

广东药学院 李春梅 第 二 章核酸的结构和功能 Structure and Function of Nucleic Acid 一、核酸的发现和研究工作进展 1868年 Fridrich Miescher从脓细胞中提取“核素” 1944年 Avery等人证实DNA是遗传物质 1953年 Watson和Crick发现DNA的双螺旋结构 1968年 Nirenberg发现遗传密码 1975年 Temin和Baltimore发现逆转录酶 1981年 Gilbert和Sanger建立DNA 测序方法 1985年 Mullis发明PCR 技术 1990年 美国启动人类基因组计划(HGP) 1994年 中国人类基因组计划启动 2001年 美、英等国完成人类基因组计划基本框架 体内重要的游离核苷酸及其衍生物 含核苷酸的生物活性物质： NAD+、NADP+、CoA-SH、FAD 等都含有 AMP 4.DNA与RNA的区别： RNA核苷酸的戊糖是核糖而不是脱氧核糖 RNA的嘧啶是胞嘧啶和尿嘧啶，没有胸腺嘧啶 二、核酸的一级结构 定义 核酸中核苷酸的排列顺序。 由于核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。 DNA的二级结构-双螺旋结构 DNA双螺旋结构的研究背景和历史意义 DNA双螺旋结构模型要点 DNA的超螺旋结构及其在染色质中的组装 DNA的超螺旋结构 原核生物DNA的高级结构 DNA在真核生物细胞核内的组装 DNA的功能 （3）双螺旋的直径为2.37 nm，碱基平面与螺旋纵轴垂直。相邻碱基平面距离0.34 nm，螺旋一圈螺距3.54 nm，一圈10.5 对碱基。 三、DNA是遗传物质的物质基础 * mRNA结构特点 （3）mRNA依据自身的碱基序列指导蛋白质氨基酸序列的合成，也就是为蛋白质的生物合成提供模板 mRNA分子上从5?至3?方向，由AUG开始，每3个核苷酸为一组，决定肽链上某一个氨基酸或蛋白质合成的起始、终止信号，称为密码子，或三联体密码(triplet coden)。 （4）mRNA的成熟过程是hnRNA的剪接过程 * tRNA的一级结构特点 含 10~20% 稀有碱基，如 DHU 3′末端为 — CCA-OH 5′末端大多数为G 具有 T?C 五、核酸在真核细胞和原核细胞中表现了不同的时空特性 原核细胞：没有核膜，复制、转录和翻译同一空间进行。 真核细胞：有核膜，转录和翻译在时间和空间上得以分开。 热变性 解链曲线：如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260（absorbance，A，A260代表溶液在260nm处的吸光率）值作图，所得的曲线称为解链曲线。 第 五 节 核 酸 酶 Nuclease 掌 握： 1. 核酸组成的基本单位核苷酸的结构特点及连接方式。 2. 核酸分子的一级结构。 3. DNA分子的二级结构特点及结构的意义。 4. 信使RNA、转运RNA、核糖体RNA的结构特点及功能。 5. 核酸变性、复性、分子杂交的概念。 熟 悉： 1. 核酸的元素组成。 2. 核酸其他的主要理化性质。 3. 核酶。 了 解： 1. DNA的超螺旋结构。 2. 其他小分子RNA的种类。 3. 分子杂交的基本应用。 4. 核酸酶。 DNA-DNA 杂交双链分子 变性 复性 不同来源的DNA分子 核酸分子杂交的应用 研究DNA分子中某一种基因的位置 鉴定两种核酸分子间的序列相似性 检测某些专一序列在待检样品中存在与否 是基因芯片技术的基础 常用的核酸分子杂交技术有：原位杂交、斑点杂交、Southern杂交及Northern杂交等。 1、?? Southern Blotting DNA样品 → 酶切 → 电泳 → 碱变性 → 转膜 → 固定 → 杂交 → 洗涤 → 放射自显影 变性（NaOH 0.5mol/L） 转膜（NC膜，尼龙膜） 固定（80℃，4-6h） 杂交（高盐浓度，68℃，几小时） Southern Blotting可用于DNA之间同源性分析，确定特异性DNA序列的大小和定位。 2、?? Northern Blotting 研究对象是mRNA，探针一般是DNA。 总RNA或mRNA需在变性条件下电泳（乙二醛、甲醛） 3、?? Western Blotting 抗原与抗体的杂交 研究克隆基因表达产物、鉴定克隆株的常用技术。 ★琼脂糖电泳可以用于DNA分子量的测定 ★琼脂糖电泳可以用于DNA的制备与纯化 核酸酶是指所有可以水解核酸的酶 依据底物不同分类 DNA酶(deoxyribonuclease, DNase)： 专一降解DNA。 RNA酶 (ribonuclease, RNase)： 专一降解RNA。 依据切