蛋白质定向进化的研究进展-生物化学与生物物理进展.PDFVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2015, 42(2): 123~ 131 白质定向进化的研究进展* 王晓 1, 2, 3)** 王白云1, 2, 3)** 智文1, 2, 3)*** 陈 涛1, 2, 3) 赵学明1, 2, 3) 1) 2) 3) ( 津大学化工学院，天津300072； 津大学系统生物工程教育部重点实验室，天津300072； 津化学化工协同创新中心，天津300072) 摘要 在工业生物催化过程和生物细胞工厂构建方面，蛋白质定向进化被广泛地应用于酶的分子改造 蛋白质定向进化不仅 可以针对某一目的蛋白进行改造，还可以改善代谢途径、优化代谢网络、获得期望表型细胞 为了获得更高效的突变效率， 快捷、高通 的筛选方法，提高蛋白质定向进化的效果，研究者不断开发蛋白质体内、体外进化方法，取得了新的进展和应 用 本文介绍了最近发展的蛋白质定向进化技术的原理、方法及特点，总结了突变文库的筛选方法和蛋白质定向进化的最新 应用，最后讨论了蛋白质定向进化存在的挑战和未来发展方向 关键词 蛋白质定向进化，随机进化，半理性进化，理性进化，筛选 学科分类号 Q5 ，Q7，Q81 DOI: 10.16476/j.pibb .2014.0059 1859 年，达尔文在 《物种起源》 中提出了生 究表明，蛋白质定向进化被成功地应用在代谢途径 物进化论学说，揭示了生物在遗传、变异、生存斗 的关键酶设计、新底物催化功能的开发、创造全新 争和自然选择中是不断发展变化的 近代生物学的 [6-7] 功能蛋白质以及筛选和鉴别预期功能蛋白质中 ， 发展使人们认识到蛋白质进化大多是由于某 点突 在代谢工程和合成生物学领域发挥了重要作用 [1] 变或修饰的积累 ，而在自然条件下，蛋白质性质 1 蛋白质定向进化策略 或功能的改变通常需要很长时间 早期人们采取了 各种诱变手段以期能够对蛋白质性能进行改造，如 蛋白质定向进化的本质是构建分子多样性文库 [2] [8] 最早在 1982 年，Winter 等 报道了通过基因定位 以及从文库中筛选到性状有改进的突变体 ，根据 诱变获得改进的酪氨酸tRNA 合成酶 1983 年， 文库构建原理的不同，可分为随机进化、半理性进 Ulmer [3] 在 《科学》 (Sc ience) 上提出蛋白质工程 化和理性进化三种策略，其大致思路均为由某一靶 (protein engineering)一词，指按照人们的需求，通 基因或一族相关的家族基因起始，通过对编码基因 过对蛋白质信息和功能的分析，设计改造蛋白质分 进行突变或重组，创建分子多样性文库；筛选文库 子 但当人们试图基于蛋白质结构对其进行改造 获得能够编码改进性状的基因，作为下一轮进化的 时，由于结构生物信息的匮乏以及蛋白质结构的复 模板；在短时间内完成自然界中需要成千上万年的 [9] 杂性，合理设计进行得十分困难，蛋白质工程的发 进化 ，从而获得具有改进功能或全新功能的蛋白 展受到了严重制约[4] 质 表1 总