生化大题4.docVIP

已知有一个mRNA分子在体外，你怎样才能使它翻译出相应的蛋白质？ 1以mRNA为模板，合成双链cDNA 2扩增，与载体相连形成重组体 3转染表达载体，筛选克隆，基因表达 真核生物由hnRNA转变为mrRNA包括哪些加工过程？ a.在专一的酶促作用下，5‘端形成特殊的帽子结构b.在RNA末端腺苷酸转移酶的作用下，在3’端添加polA尾巴。c.通过特殊的机制，去掉内含子，将外显子连接起来d.对链内特定的核苷酸进行甲基化修饰。 简述cAMP介导的细胞信号转到途径;cAMP的生成过程及其在细胞信号转导过程中的作用机制 在cAMP信号途径中，细胞外信号与相应受体结合，调节腺苷酸环化酶活性，通过第二信使cAMP水平的变化，将细胞外信号转变为细胞内信号。cAMP信号通路是G蛋白耦联受体所介导的细胞信号通路的方式之一。 1激素→受体→G蛋白→腺苷酸环化酶→催化ATP生成cAMP2 cAMP激活蛋白激酶A（PKA）3 PKA→磷酸化某些酶，改变酶的活性，对代谢进行调节 简述原核生物中转录终止的基本方法 a.一是需要蛋白质因子ρ（Rho）的参与，ρ因子能与转录中的RNA结合，启动ρ因子ATP酶活性，并向RNA的3’端滑动，划至RNA附近时，RNA聚合酶暂停聚合活动，使RNA:DNA解链分离转录的RNA释放种植转录。b.另一是纯化的的RNA聚合酶不需要其他蛋白质因子的参与，可使转录终止，即不依赖ρ因子的转录终止机制，模板DAN在转录终止点附近有特殊核苷酸有反向重复对称CG序列，终止位点上游还有polyA，这样转录生成的产物有茎环结构且不稳定 参与蛋白质生物合成的RNA主要有哪几类？它们的作用分别是什么？1信使RNA（mRNA）：把DNA上的遗传信息精确无误地转录下来，然后再由mRNA的碱基顺序决定蛋白质的氨基酸顺序，完成基因表达过程中的遗传信息传递过程。2 转运tRNA：把氨基酸搬运到核糖体上，tRNA能根据mRNA的遗传密码依次准确地将它携带的氨基酸连结起来形成多肽链。 3核糖体RNA（rRNA）：rRNA单独存在时不执行其功能，它与多种蛋白质结合成核糖体，作为蛋白质生物合成的“装配机”。 简述原核生物基因调控的特点:⑴RNA聚合酶只有一种，其σ因子决定RNA聚合酶识别特异性;⑵操纵子模型的普遍性；⑶阻遏蛋白与阻遏机制的普遍性；⑷转录和翻译偶联进行；⑸转录后修饰、加工过程简单；⑹转录起始是基因表达调控的关键环节。 简述乳糖操纵子的调节机制 a乳糖操纵子的组成：大肠杆菌乳糖操纵子含Z、Y、A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰转移酶，此外还有一个操纵序列O，一个启动子P和一个调节基因I。 b阻遏蛋白的负性调节：没有乳糖存在时，I基因编码的阻遏蛋白结合于操纵序列O处，乳糖操纵子处于阻遏状态，不能合成分解乳糖的三种酶；有乳糖存在时，乳糖作为诱导物诱导阻遏蛋白变构，不能结合于操纵序列，乳糖操纵子被诱导开放合成分解乳糖的三种酶cCAP的正性调节：在启动子上游有CAP结合位点，当大肠杆菌从以葡萄糖为碳源的环境转变为以乳糖为碳源的环境时，cAMP浓度升高，与CAP结合，使CAP发生变构，CAP结合于乳糖操纵子启动序列附近的CAP结合位点，激活RNA聚合酶活性，促进结构基因转录，调节蛋白结合于操纵子后促进结构基因的转录，对乳糖操纵子实行正调控，加速合成分解乳糖的三种酶。 d,协调调节：乳糖操纵子中的I基因编码的阻遏蛋白的负调控与CAP的正调控两种机制，互相协调、互相制约。 简述PCR技术的反应体系和主要步骤 反应体系：1耐热DNA聚合酶（Taq酶）2模板DNA 3一对引物A与B 4 dNTP底物 5 缓冲液 步骤：1高温变性 95℃，15秒，加热使模板DNA双链解开成单链 2低温退火 55℃左右，约30秒 变性后突然降温，促使过量的引物A和B与单链模板互补结合，同时防止DNA原来两条链的复性结合 3中文聚合 75℃，一般90秒左右，Taq酶此时在引物3’-羟基端按照互补原则逐个加上dNTP，使DNA由单链成为双链。重复以上三步反应多次（一般25-30次）即可获得大量相同的DNA片段 密码子的特点？ 通用性：真核原核动植物共用一套密码子 简并性：一种氨基酸可对应几种氨基酸 方向性：5到3 摆动性：密码子的第3位碱基与对应的反密码子碱基有时不严格互补 连续性：中间无标点，信使RNA中碱基的插入或缺失都可引起变异 DNA复制的基本规律：半保留复制半不连续复制双向复制高保真性。 保真性规律：遵守严格的碱基配对规律聚合酶在复制延长中对碱基对的选择功能复制出错时有随时的校读功能。 重组DNA技术的步骤分离目的基因限制酶内切目的基因与载体连接重组体转入宿主细胞筛选阳性克隆表达蛋白质。 信号传导过程：特定的细胞释放信号物质信息无止境扩散或学液循环到