microRNA简介生物教学课件.ppt

microRNA简介 前言 近些年来，人类发现了许多不同种类的RNA分子，其中最为重要的是小RNA分子的发现。 有些小RNA分子 能直接调控某些基因的开关从而控制细胞的生长发育并决定细胞分化的组织类型 小RNA分子本身又包含了若干类RNA，根据小 RNA 的生成、结构和功能大约可分为以下三类：  a miRNA （microRNA) b siRNA (short interfering RNA) c 其他小RNA What are microRNAs？ miRNA是广泛存在于真核生物中的一组短小的、不编码蛋白质的RNA家族，它们是由19-25个核苷酸组成的单链RNA（3‘端可有1~2个碱基长度的变化）； miRNA的表达具有组织特异性和阶段特异性。即：在不同组织中表达有不同类型的miRNA,在生物发育的不同阶段里有不同的miRNA表达； The importance of microRNAs Regulating the expression of signaling molecules ( cytokines, growth factors, transcription factors, proapoptotic antiapoptotic genes, etc. ) Important effects in Apoptosis Cell proliferation Stem cell division Neuronal cell fate Developmental timing Hematopoietic cell fate Regulation of insulin secretion 1993年 Lee等人用遗传分析的方法在秀丽新小杆线虫（Caenorhabditis elegan）中发现了第一个可 时序调控胚胎后期发育的基因lin-4； 这种单链 RNA通过碱基配对的方式结合到靶 mRNA lin - 14 的 3’末端非翻译区(3’ UTR) ,从而抑制 lin - 14 的翻译 ,但并不影响其转录。 2001年10月 《science》报道了三个实验室从线虫、果蝇和人体克隆的几十个类似C.elegan的lin-4的小RNA基因，称为microRNA。 2002年 Reinhart等又在线虫C.elegan中发现第二个异时性开关基因let-7； 随后多个研究小组在包括人类、果蝇、植物等多种生物物种中鉴别出数百个miRNAs。 microRNAs的特征 ① 它广泛存在于真核生物中，本身不具有开放阅读框架（ORF) ，是一组不编码蛋白质的序列 ②通常长度为21～23nt，但在3’端有1～2个碱基的长度变化（miRNA具体长度尚无统一标准）； ③成熟的miRNA 5’端有一磷酸基团，3’端为羟基，这一特点可以和大多数功能RNA 降解片段和寡核苷酸区别开来； ④大多数miRNA在各个物种间具有高度的进化保守性。 ⑤ 许多miRNA在表达上具有组织特异性（Lee等，2001)。 ⑥大多数已发现的miRNA的表达都具有时序性。 miRNA的成熟 据体内外实验研究表明miRNA的生成至少需要两个步骤： 1）由长的内源性转录本（pri-miRNA)生成70nt左右的miRNA前体（pre-miRNA)，该过程发生在细胞核; 2)将pre-miRNA加工为成熟miRNA，该过程发生在细胞质中。 Pre-miRNA Pre-miRNA 是由内源性基因间区或内含子的DNA反向重复序列转录而来,它是一种长约70nt的非编码RNA, 具有茎-环结构也即发夹状结构。 Pre-miRNA在Dicer的作用下可被剪切成miRNA miRNA 只是pre-miRNA 茎中的一个臂 miRNA与靶mRNA的作用模式： 1）二者不完全互补，即二者不完全时配对结合时，主要影响翻译过程而对mRNA的稳定性无任何影响。如线虫的lin-4 2）二者完全互补，即二者完全配对结合后，类似siRNA与靶mRNA的结合，特异性的切割mRNA。如miR39/miR171 3）上述两种模式均具备。当其与靶mRNA完全互补配对时，直接靶向切割mRNA，而不完全互补配对时起调节基因翻译的作用。如let-7 果蝇/线虫 Biogenesis of microRNAs 分子信息学筛选miRNA的原理： 该方法的出发点为前体的发夹状结构及miRNA在物种间的保守性。 miRNA基因可能定位于编码蛋白基因的内含子区域（有意义链或反意义链）及远离任何已知基因的基因间区域。 一些时候，几个发夹状