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* * 实验二 植物细胞渗透势的测定(质壁分离法) 一、实验原理 组织细胞内的汁液与外界溶液处于渗透平衡时，若细胞的压力势Ψp=0，则细胞汁液的渗透势Ψs等于该溶液的Ψs。该溶液的浓度为组织细胞的等渗浓度。用质壁分离法测定时，细胞的等渗浓度界于刚刚能引起初始质壁分离的最低浓度和尚不能引起质壁分离的最高浓度之间。将等渗浓度的数值带入公式，可求出其Ψs。 二、器材与试剂 洋葱鳞片叶带有色素的外表皮，显微镜，培养皿，玻棒，1mol／L蔗糖溶液。 三、方法与步骤（见实验指导P5-6） 在洁净的培养皿内放入0.1～O.5 mol／L等梯度浓度蔗糖溶液各10ml，进行实验，以半数以上细胞发生初始质壁分离的最低浓度与不能引起质壁分离的最高浓度的平均值作为等渗浓度计算细胞的渗透势Ψs。 Ψs = -RTiC R：理想气体常数，0.083×105 L·pa/mol·k T：绝对温度（273oC + toC），单位k i：解离系数，蔗糖等于1， C：等渗溶液的摩尔浓度，单位mol／L 四、实验报告 1、绘图表示细胞质壁分离过程。 2、回答P8实验作业2。 图1 植物成熟细胞示意图 （1） （2） （3） 0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5（mol/L） （1）低渗溶液 不发生质壁分离 （2）等渗溶液 介于发生质壁分离与不发生质壁分离之间 （3）高渗溶液 发生质壁分离 组织细胞在等渗溶液当中处于渗透平衡时 Ψw（细胞）= Ψs（溶液） Ψw = Ψs + Ψp + Ψm + Ψg Ψw：细胞水势 Ψs：渗透势 Ψp：压力势（=0） Ψm：衬质势，通常忽略不计 Ψg：重力势，通常忽略不计 因此Ψw（细胞）= Ψs（细胞） 即Ψs（细胞） = Ψs（溶液） 该溶液的浓度称为组织细胞的等渗浓度（C） 将组织细胞分别放入九个浓度的蔗糖溶液中（0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5），低浓度时，细胞不发生质壁分离，高浓度时，细胞发生质壁分离，实验中确定两个浓度A、B。 A：半数以上细胞发生初始质壁分离的最低浓度 B：不能引起质壁分离的最高浓度 C=（A+B）/2，将C代入公式Ψs = -RTiC Ψs：细胞渗透势 R：理想气体常数，0.083×105 L·pa/mol·k T：绝对温度（273oC + toC），单位k i：解离系数，蔗糖等于1 C：等渗溶液的摩尔浓度，单位mol／L 试剂 1 mol/L蔗糖溶液；蒸馏水 材料 洋葱球茎；紫鸭趾草；擦镜纸；吸水纸； 盖玻片；载玻片；标签；刀片 仪器 显微镜；培养皿9套；玻棒9根；镊子1把； 移液枪5 mL 1支、1 mL 1支 实验步骤 　　 　　1、取9个培养皿，编号，分别配制浓度为0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5mol/L的蔗糖溶液各10ml于培养皿内。 　 实验步骤 　　 　　2、用镊子撕取同一鳞片的洋葱外表皮分别投入各浓度的蔗糖溶液中（每个浓度放置2片以上），使其完全浸没，约5-10min。 实验步骤 　　 　　3、从高浓度开始依次进行制片镜检，在载玻片上先用玻棒沾一滴同浓度的蔗糖，再取材料，展平，盖上盖玻片。 4、将水浸片放入显微镜下观察质壁分离的情况，检查邻近20个以上细胞，记录观察结果。 显微镜-电脑使用说明 1．点击桌面上“TIGER StuMedia”图标，进入学习软件。 2．点击“摄像”按钮，进入摄像状态，冻结后可存盘。 3．点击“调入”键，可显示磁盘里的图像。 显微镜-电脑关闭说明 1．用擦镜纸将显微镜镜头拭擦干净并复位，关闭显微镜电源开关。 2．关闭“TIGER StuMedia”学习软件。 3．关闭电脑。