细胞工程-第六章胚胎工程111511.ppt

雌性生殖器官 两细胞学说 膜细胞合成的雄激素通过基膜进入颗粒细胞，在芳香化酶系的作用下雄激素转变为雌激素，这是雌激素合成的主要方式，两细胞学说。 生殖季节（性季节） (1)终年多次发情 猪、牛 (2)季节性多次发情 马、绵羊 (3)季节性单次发情 狗、熊 精子显微注射体外受精技术 牛胚胎分割 胚胎冷冻保存技术： 主要包括抗冷冻保护剂添加； 植冰和降温速度（成功的关键）； 胚胎解冻方法； 抗冷冻保护剂解脱等。 性别控制 性别控制（Sex Control）是经过人为干预，使动物的后代按人们所需的性别而繁衍的技术。 其目的有三： 1）可以从受性别限制的性状和其相应受影响的性状上获益，如母畜产奶，公畜产肉等； 2）消灭不理想的隐性性状，防止性连锁疾病； 3）加快遗传进展及畜群的更新。 性别决定的遗传学机制 Sinclair et al. (1990)在人类Y染色体的短臂近似常染色体区域分离和克隆到一个单拷贝基因，与性别决定相关，称之为性别决定区Y基因（Sex-determined region Y-linked gene, SRY;小鼠用Sry表示）。其编码蛋白SRY所含HMG box在许多动物中保守，并在成年动物睾丸中特异表达。 SRY/Sry现已在包括有袋类和真兽亚纲动物在内的哺乳动物Y染色体上发现了其同源基因。SRY/Sry不但与睾丸决定有关，而且还是睾丸决定过程中所必需的唯一来源Y染色体的基因。 性别控制的途径 就目前研究的内容，对家畜性别控制主要从两个方面进行： 1、人工受精过程的性别控制； 2、胚胎移植过程中的性别控制。 精子分离与鉴定的方法 X，Y精子的生物学差异 X，Y精子的生物学差异 Y精子F小体 精子的重量 精子运动和表面电荷 精子表面H-Y抗原的分布 精子的耐酸碱性 Y精子F小体 1968年Cosperson等以奎纳克林-马斯德氏法在研究男性染色体时发现，在Y染色体长臂末端发出有比其它部分强的荧光亮点，将这些点称为F-A小体， 1970年Barlow等首次报道在Y精子头部发现F小体。且F小体在人和家畜的精子上都能见到。后来经实验反复证明，有F小体的精子一定是Y精子，而没有的则是X精子。 精子的重量 X与Y精子在重量和比重上的唯一差别是两者所含DNA量的不同。X染色体比Y染色体体重大，DNA含量多。两者DNA含量的差异牛为3.9％，绵羊为2.4％，田鼠为12.5％。家畜的差异一般在3～5％之间。由于重量的差异，从而引起精子在稀释液中的运动力、沉降速度等不同。 精子运动和表面电荷 一般认为Y精子比X精子的活力强，且在含有血清白蛋白的稀释液中能沿直线运动。 精子的表面均带有负电荷，但X、Y精子表面膜电荷的分布有差异。Y精子尾部膜电荷量较高，而X精子头部膜电荷含量较高。可利用电泳时，X、Y精子在电场中方向不同进行分离。 精子的耐酸碱性 在弱酸弱碱中， Y精子嗜碱而不耐酸， X精子与之相反。 精子表面H-Y抗原的分布 H-Y抗原即雄性特异性组织相容性抗原。已证实，只有Y精子才能表达H-Y抗原。 H-Y抗原是一种弱抗原，其分布依精子的来源不同而有差异，由附睾头分离的精子H-Y抗原主要分布于靠近精子的尾部。附睾尾分离的精子H-Y抗原主要分布在顶体后端，而绵羊和牛射出的精子H-Y抗原则分布在顶体后部和尾部中段。 精子分离的研究现状 沉淀法 离心法 电泳法 免疫学分离法 免疫亲和柱层析法 Y特异性DNA探针法 用控制酸碱度来控制性别 流式细胞分类器 除上述方法外，还有白蛋白沉淀法、流动分离法、层流分离法、Y特异性DNA探针法等分离精子和控制性别的方法。这些控制家畜性别的研究，取得一定成就，但迄今为止，在分离精子控制性别方面所做的种种努力和尝试均未取得令人满意的成果。而应用流式细胞分类器分离精子，已取得了比较准确的结果。 胚胎性别鉴定 目前，较理想的家畜性别控制的途径是进行胚胎的性别鉴定。将移植前胚胎进行性别鉴定对畜牧业生产具有重要意义。根据胚胎性别鉴定方法的性质，性别鉴定可分两大类，非分子生物学方法和分子生物学方法，其发展过程也是由非分子生物学方法到分子生物学方法的过渡的，即古老的核型分析—免疫学方法—分子生物学方法的过程。家畜性别控制可以通过对其胚胎进行鉴定，然后按人们所需的性别进行移植，人为地改变畜群的性比例，以达到性别控制的目的。 胚胎性别的鉴定方法 细胞学方法 生物化学法 免疫学方法 分子生物学方法 细胞学方法 主要是指通过核型分析，对胚胎进行性别鉴定。该方法是将胚胎用含有丝分裂阻滞剂的培养液培养，然后诱