酶工程抗体酶、核酶和极端酶.ppt

抗体酶 核酶 极端酶 Abzyme Ribozyme extremozyme 3）酶的活性和合成受到代谢调节，种类有限。 抗体只有在抗原存在时才产生，种类无限。 3 引入法 将催化基团或辅助因子引入到抗体的抗原结合部位，可采用选择性化学修饰方法，亦可利用蛋白质工程和基因工程技术 引入法举例 抗体酶的催化反应 2．重排反应 3．氧化还原反应 5．磷酸酯水解反应 6．磷酸酯闭环反应 7. 光诱导反应 b.光裂解反应 研究展望 1． 研究酶作用机理，获得蛋白质结构与功能间关系的一般规律。 2． 获得一类新型的蛋白酶。 3． 催化天然酶不能催化的反应。 第二节 核 酶（Ribozyme) 一、核酶的概念 二、核酶的种类 三、核酶的应用 四、核酶面临的问题 五、影响核酶活性的因素 ribozyme的发现 80年代初期，美国科罗拉多大学博尔德分校的Thomas Cech和美国耶鲁大学的Sidnery Altman各自独立地发现RNA具有生物催化功能.从而改变了生物催比剂的传统概念。 为此，T.Cech和S.Altman共同获得了1989年度诺贝尔化学奖。 自然界存在催化分子内反应（in cis）的ribozyme(自我剪接型和自我剪切型)和催化分子间反应(in trans)的ribozyme。 自我剪接ribozyme分类 自我剪接ribozyme可分为两类： Ⅰ型IVS：均与四膜虫大核rRNA前体的IVS结构相似、催化自我剪接需鸟苷（或5′鸟苷酸）和Mg2+参与。 Ⅱ型IVS ：结构与四膜虫的不同，而与细胞核mRNA前体中的IVS相似。它催化自我剪接反应不需要鸟苷或鸟苷酸参与，但仍需Mg2+ 2．自我剪切ribozyme的分类 自我剪切ribozyme, 自我剪切的RNA结构有锤头结构和发夹结构，其中尖头指出自我剪切的部位。 自我剪接ribozyme：包含剪切与连接两个步骤。 几种能进行自我剪切的RNA结构 催化分子间反应的ribozyme的分类 如：L-19IVS具有5种酶活性，可催化多种分子间反应。 1.剪接型核酶 剪接型核酶的作用机制是通过既剪又接的方式除去内含子（Intron)。 1）I类内含子的自我剪接(Self-splicing) I型IVS是与四膜虫26srRNA前体的IVS结构相似的间隔序列，具有环状结构。通过转磷酸酯反应，生成成熟的26srRNA及G-IVS，G-IVS经两次环化生成L-19IVS。催化过程需要鸟苷酸或鸟苷以及镁离子参与。 剪接机制 L-19IVS在体外的多种酶活性 2）Ⅱ类内含子的自我剪接 Ⅱ型IVS是与细胞核mRNA前体的IVS结构相似的间隔序列。通过转磷酸酯反应，生成成熟的RNA及套环状的IVS。催化的剪接反应不需要鸟苷或鸟苷酸参加，但仍需要镁离子(Mg2+)。 剪接机制 2.剪切型核酶 这类RNA进行自身催化的反应是只切不接。1）自体催化剪切型 剪切机制 发夹（hairpin ）结构 1989年汉普（Hample）研究烟草环斑病毒（sTRSV）的负链RNA的自我剪切反应，提出发夹结构（hairpin structure）模型。 发夹核酶结构模型 Ribozyme研究进展与展望 对各种已知ribozyme结构与功能关系的研究。可找出其结构功能域和必需基团，据此可进行分子改造，以获得分子更小的、高效的ribozyme 研究热点： 从催化分子内反应的自我剪切ribozyme设计出催化分子间反应的ribozyme. Ribozyme的固定化 Ribozyme的固定化已成功，将在医学、工业上获得应用。 意义： 对各种RNA-蛋白质复合物酶的分离鉴定，对许多具有特别重要生物功能的RNA和蛋白质构成的颗粒体。在自然界将会发现更多的具有自我剪接或自我剪切的RNA分子和以非RNA为底物的ribozyme p 3’ HO-G p 3’ p P-G OH p P-G 3‘ HO Ⅰ类内含子的剪接机制 Mg 2+或Mn 2+ GMP,GDP,GTP 外显子 内含子或居间序列（Intervening sequence,IVS) 5‘ UCUAAA IVS GUAA Pre-rRNA UCU A A A GUAA UCUoH3’ 5‘GAAA GUAA UCUUAA 5’GAAA GOH 3’ G-IVS L-19IVS 19nt 5‘ 3‘ rRNA 5‘ 3‘ 5‘ pGOH 3‘ 5‘ 3‘ 四膜虫rRNA前体自我剪接反应 1、转核苷酸