基于maldi源生物质谱技术平台扬州大学测试中心.pptVIP

标记：在缺乏Lys和Arg的培养基中添加Lys和Arg的同位素Lys(D4或13C6 15N4)、Arg(13C6,或13C6 15N4)等培养细胞，使蛋白质被标记成“中型”或“重型”； 细胞处理、裂解、提取蛋白质； 等量混合对照与处理组蛋白质、SDS电泳、染色； 割取蛋白质条带，胰蛋白酶消化，质谱分析。 细胞代谢标记（SILAC） 生物大分子的分子量分析 BSA 某蛋白聚合体 MALDI 样品基本要求 磷酸盐缓冲液 50 mM 重碳酸铵 30 mM Tris buffer 100 mM 胍 (盐酸盐, 硫酸盐) 1 M Triton 0.1% SDS 0.01% 碱金属盐 1 M 甘油 1% 蛋白样品具体要求 挖点或胶内酶解操作过程中不可使用劣质国产枪头和指形管，防止塑料峰污染 样品防止角蛋白污染 胶粒大小：1.5mm3以下 胶内酶解试剂（色谱级） 染色方法：考染/银染（银染试剂中不能含有戊二醛） 种属名称，搜库要求（参数） LC-MALDI的样品中不要含有乙腈，最好进行过除盐步骤 UHR-TOF maXis 超高分辨飞行时间质谱仪 仪器型号：maXis 制造厂商：德国Bruker公司 质谱类型：四级杆-飞行时间 主要技术指标： 质量范围：m/z 50～2500 质谱功能：MS，MS/MS 分辨率： 50000 ( E