几种测定抗菌药物最低抑菌浓度MIC方法11常量肉汤-中国试剂网.PDFVIP

中国试剂网 3.10.2.16 几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC ）方法 1.1.常量肉汤稀释法 1.1.1.抗菌药物贮存液制备 抗菌药物贮存液浓度不应低于 1000μg/ml( 如 1280μg/ml)或 10 倍于最高测定浓度。溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。 抗菌药物直接购自厂商或相关机构。所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计 算。例如：需配制 100 ml 浓度为 1280μg/ml 的抗生素贮存液，所用抗生素为粉 剂，其药物的有效力为750μg/mg 。用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg 。根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml ）/1280μg/ml=107.0ml ， 然后将182.6 mg 抗生素粉剂溶解于107.0ml 稀释剂中。制备抗菌药物贮存液所用 的溶剂和稀释剂见表5 。配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存 期不超过6 个月。 1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围 根据 NCCLS 抗菌药物敏感性试验操作标 准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。 1.1.3. 培养基 NCCLS 推荐使用Mueller-Hinton （MH ）肉汤，pH7.2~7.4 。需氧菌 及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时， 应在肉汤中加入2% （W/V ）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH 肉汤。 嗜血杆菌属菌使用 HTM 肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马 血的MH 肉汤。 1.1.4.接种物的制备 有2 种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取 形态相似待检菌落3-5 个，接种于4-5ml 的水解酪蛋白（MH ）肉汤中，35℃孵 育2-6h 。增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH 肉汤校正浓度至0.5 麦氏比 浊标准，约含 1~2×108CFU/ml。二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如 流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直 接取培养 18~24h 的菌落调配成0.5 麦氏比浊标准的菌悬液。用MH 肉汤将上述 菌悬液进行1 ∶100 稀释后备用。注意应在15 分钟内接种完配制好的接种物，并 取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养，以检查接种物纯度。 1.1.5.稀释抗菌药物的制备及菌液接种 取无菌试管（13×100mm）13 支，排成一 排，除第 1 管加入 1.6mlMH 肉汤外，其余每管加入MH 肉汤1ml，在第1 管加 入抗菌药物原液（如1280μg/ml ） 0.4ml 混匀，然后吸取1ml 至第2 管，混匀后 中国试剂网 3.10.2.16 再吸取 1ml 至第 3 管，如此连续倍比稀释至第 11 管，并从第 11 管中吸取 1ml 弃去，第12 管为不含药物的生长对照。此时各管药物浓度依次为256 、128、64、 32、16、8、4 、2 、1、0.5、0.25μg/ml 。然后在每管内加入上述制备好的接种物 各 1ml，使每管最终菌液浓度约为5×105CFU/ml 。第1 管至第 11 管药物浓度分 别为128、64、32、16、8、4 、2 、1、05、0.25、0.125μg/ml 。 1.1.6.孵育 将接种好的稀释管塞好塞子，置 35℃普通空气孵箱中孵育 16~20h； 嗜血杆菌和链球菌在普通空气孵箱中孵育 20~24h ；对可能的耐甲氧西林葡萄球 菌和耐万古霉素肠球菌应持续孵育满24h 。 1.1.7.结果判断与解释 在读取和报告所测试菌株的 MIC 前，应检查生长对照管 的细菌生长情况是否良好，同时还应检查接种物的传代培养情况以确定其是否污 染，质控菌株的MIC 值是否处于质控范围。以肉眼观察，药物最低浓度管无细 菌生长者，即为受试菌的 MIC 。甲氧苄胺嘧啶或磺胺药物的肉汤稀释法终点判 断，与阳性生长对照管比较抑制80%细菌生长管药物浓度为受试菌MIC 。 根据NCCLS 推荐的分界点值标准，判断耐药（resistant, R ）、敏感(susceptible, S)