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RNAi基因沉默机制 基因沉默 基因沉默的发现 首先在转基因植物中发现: 1990年， Napoli和其同事在研究转查尔酮合成酶（chalcone synthase， CHS）基因chs的矮牵牛植株中，发现chs基因和内源基因同时被抑制了，称为“共抑制”。 接着和线虫、真菌、昆虫、原生动物以及才鼠中陆续发现。大量的研究表明，环境因子、发育因子、DNA修饰、组蛋白乙酰化程度、基因拷贝数、位置效应、生物的保护性限制修饰以及基因的过度转录等都与基因沉默有关。 基因沉默的发现 RNA Silencing “A system used by eukaryotic cells to identify and destroy aberrant or overexpressed RNA in their cytoplasm.” ‘cosuppression’ ‘post-transcriptional gene silencing’ (PTGS) ‘RNA interference’ (RNAi) ‘quelling’ ‘gene silencing’ PTGS 　　PTGS在多种生物中有共性，对PTGS的激活和与其相关的RNA降解调控过程有了初步的认识。也发现植物病毒在转基因植物和非转基因植物中都能和转基因一样诱发转录后基因沉默。令人吃惊的是，转基因植物的共抑制现象（转基因与同源的内源基因一起失活）、转基因植物的病毒抗性和非转基因植物对病毒正常自然侵染的抗性、真菌的quelling现象（真菌中的共抑制）、各种动物的RNA干扰(RNA interference，RNAi)以及转座因子的转座失活等这些表面看来完全不相关的现象中竟然存在着非常相似的基因沉默机制，即PTGS。这种基因沉默可能是生物体的本能的反应，因为无论是转基因、转座因子还是病毒，对植物而言都是诱发突变的外来侵入的核酸，植物为保护自己，在长期的生物进化中，形成了基因沉默这种限制外源核酸入侵的防卫保护机制。 基因沉默现象 总的看来，基因沉默发生在两种水平上: 一种是由于DNA甲基化、异染色质化以及位置效应等引起的转录水平上的基因沉默（transcriptional gene silencing,TGS） 另一种是转录后基因沉默(post-transcriptional gene silen-cing,PTGS)，即在基因转录后的水平上通过对靶标RNA进行特异性降解而使基因失活。在这两种水平上引起的基因沉默都与基因的同源性有关，称为同源依赖性的基因沉默(homology-dependent gene silencing,HDGS)。 基因沉默分类 基因沉默 基因沉默（gene silencing）： 指生物体中特定基因由于种种原因不能表达。 作为一种基因表达调控机制，基因沉默通常只在外来核酸入侵时发挥作用。 这里特定基因主要针对外源基因，也包括与外源基因同源的内源基因。 孟祥兵, 王秀芳. 生命的化学. 2001, 21(2), 111- 113 热点：RNAi RNAi： RNA 干涉（RNA interference） 1998 Andrew Fire和Craig Mello提出 指通过转入外源RNA而使细胞内特定的同源基因沉默的现象 属于转录后水平基因沉默 RNAi的机制 1994 Dougherty等 提出 RNA阈值模型（RNA threshold model） 1996 English 提出 异常RNA模型（abRNA model） Small interfering RNA (siRNA)： 是一种小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。 　siRNA有如下特点： 　 　1. 长度约在22nt左右。 　　2. 依赖Dicer酶的加工，是Dicer的产物，所以具有Dicer产物的特点。 　　3. 生成需要Argonaute家族蛋白存在。 　　4. 是RISC组分。 　　5. siRNA合成是由双链的RNA或RNA前体形成的。 　　6. siRNA一般是人工体外合成的，通过转染进入人体内，是RNA干涉的中间产物；植物体内也存在内源的siRNA。 　　7. 结构上， siRNA是双链RNA。 　　8. 在Dicer酶的加工过程中， siRNA对称地来源于双链RNA的前体的两侧臂。 　　9. 在作用位置上， siRNA可作用于mRNA的任何部位，并与m