[工学]DNA重组技术 分子生物学.pptVIP

讨论4个问题： 1.什么是基因工程——基因工程的概念。 2.为什么能进行基因工程——基因工程的原理和技术。（包括3大理论和3大技术准备） 3.怎样进行基因工程——3大步骤（DNA体外重组，重组DNA导入宿主细胞后扩增和表达，基因工程后处理） 4.基因工程的应用和前景——对于医学来说即生产基因工程产品、开展基因治疗等。 第一节 概 述 一.现代科学技术发展的特点 （一）科学技术加速发展和急剧变革 1.当代科学发展成指数增长趋势，全世界发表科技论文6000－8000/天，平均1篇/10.8秒问世。 2.人类科技知识在19世纪半衰期是50年，现在是3－5年（终身教育学习）。 3.1973年，Cohen Group第一次实现了细菌遗传性状的转移terr+nersr→terrner ，导致基因工程技术诞生，至今不到30年，人类已经拥有了克隆羊、猪等等的技术，可以复制一个生命体。（克隆羊多利1997－2003，体细胞克隆，胚胎细胞克隆） 一.现代科学技术发展的特点 (二)科学技术发展的综合化 1.19世纪中叶，科学和技术是二者分离的，它们各有独自文化传统，它们的发展往往是脱节的。 2.科学回答“是什么”“为什么”，技术回答“做什么”“怎么做”。当今科技发展已经密不可分，科学里包含技术，技术里体现科学。 3.当代科技发展有两种形式：一是突破，二是融合。突破是线性的，即从研究开发新一代的科技成果取代原有一代科技成果。融合是非线性的，即混合原有不同的科技领域，进而发展新产品，造成革命性市场，它们是互补和合作的结果。 二．基因工程的概念 （一）基因（gene）：从化学上来说，指的是一段DNA或RNA顺序，该顺序可以产生或影响某种表型（genotype，phenotype），可以由于突变生成等位基因变异体（体细胞父源和母源；正常和突变基因）；从遗传学上来说，基因代表一个遗传单位，一个功能单位，一个突变单位。 （二）基因工程（genetic engineering）：在体外通过人工剪、接，将不同来源的DNA分子组成一个杂合DNA分子(DNA分子重组体)，然后导入宿主细胞去复制扩增或表达。因为通过人工设计,得到一定的设计方案，故称为基因工程。由于整个操作在分子水平上进行，所以也称分子克隆。 二．基因工程的概念 1.“基因剪刀” ：剪取DNA的酶就像一把“基因剪刀”。 2.“缝纫针” ：连接不同来源DNA分子的酶就像一根“缝纫针”，使二者连在一起。 3.“交通工具”：使用载体好比一辆车子。 4.“乘客”：有用基因如IL2好比使乘客，车子把乘客送进宿主细胞中去繁衍生息，生产我们需要的产品或开展基因治疗（IL2/LAK→抗癌）。 我们应该记住他们—— 1.第一个实现DNA重组的人－Berg 1972年，Berg用E.coRⅠ切割SV40DNA和λ phageDNA，经过连接组成重组的DNA分子。Berg是第一个实现DNA重组的人。 （二）胚胎细胞克隆和体细胞克隆的比较 ? 项目 胚胎细胞克隆 体 细 胞 克 隆 供体细胞 胚胎细胞（核） 体细胞（核） 受体细胞 去核未受精的卵细胞 去核未受精的卵细胞 发育场所 母体宫腔 母体宫腔 关键区别 克隆的是子代（多生了一个） 复制的是自己（复制了一个） （三）克隆技术是一把双刃剑 四．基因工程三大理论，三大技术准备 （一）理论上的三大发现 1. 20世纪40年代，Avery发现了生物遗传物质的化学本质是DNA。超越时代的科学成就往往不易被人们接受，Avery当时并未赢得阵阵掌声，他的论文事隔10年以后才公开发表。 2. 20世纪50年代，Watson-crick提出了DNA结构的双螺旋结构模型，搞清楚了生物遗传物质的分子机制。 3. 20世纪60年代，确定了遗传信息的传递方式：DNA→RNA→Pr,破译了全部遗传密码，43。 （二） 技术上的三大发明 1．“基因剪刀”－限制性内切酶的发明 1970年，Smith和Wilcox在流感嗜血杆菌（Haemophilus inffuenzae）分离纯化了HindⅡ，取得了突破，打破了基因工程的禁锢，迎来了改造生物的春天，为基因工程奠定了最为重要的技术基础。 2．载体(“交通工具车子”) 直到1973年Cohen才能将质粒作为基因工程载体使用（至今一直是基因工程最重要最