[工学]第2章 氨基酸.ppt

２、核磁共振波谱 六、氨基酸混合物的分析分离 ——利用AA成分分配系数的差异 （一）分配层析法的一般原理 { 层析系统 固定相 { 流动相 附着在固相上的液体 固体 按两相所处状态分： 流动相 液体 气体 固定相 液体 液液层析 气液层析 固体 液固层析 气固层析 柱 固定相装于柱内 纸 固定相是液体，吸附在滤纸上，将样品点在纸上，用流动相展开 薄层 将有适当粘度的固定相涂在薄板上 薄膜 与纸层析相似， 纸用其它高分子有机吸附剂代替 按操作形式分： 吸附 固体 吸附能力不同 分配 液体 分配系数不同 离子交换 离子交换剂 亲和性不同 凝胶 多孔凝胶， 通过速度不同 亲和 固定相只能与一种组分结合， ——分开其它无亲和力的组分 按层析原理分： 固定相 各组分对固定相 （二）分配柱层析 填充物为亲水性的不溶物质如纤维素、 淀粉、硅胶等，收集的组分用茚三酮 显色定量。 （三）纸层析 （四）薄层层析 （五）离子交换层析 （六）气液层析 固定相支持剂颗粒细，表面积大； 采取高压，洗脱速度快。 （七）高效液相层析 * * * * * * * * * * * NH2 脱羧酶 R—CH-COOH R-CH2-NH2 +CO2 3、脱羧基反应 （生成一级胺，CO2) Glu脱羧形成γ-氨基丁酸 （三）α-羧基和α-氨基都参加的反应 1、 与茚三酮反应 2、 成肽反应 弱酸 加热 1、?? 与茚三酮反应 茚三酮在弱酸中与α-氨基酸共热，引起氨基酸的氧化脱氨，脱羧反应，最后，茚三酮与反应产物——氨和还原茚三酮反应，生成紫色物质（λmax=570nm）。 Pro、Hy-Pro与直接形成黄色化合物（ λmax=440nm） 茚三酮 水合茚三酮 C O 2 N H 3 R C H O + + + + C C C O O H O H H 2 N C H C O O H R C C C O O O H O H 水合茚三酮 还原茚三酮 水合茚三酮 还原茚三酮 篮紫色化合物 4.茚三酮反应 反应要点：该反应由NH2与COOH共同参与 应用：氨基酸定量分析（先用层析法分离） 氨基酸自动分析仪： 用阳离子交换树脂，将 样品中的氨基酸分离，自动定性定量，记录结果。 脯氨酸是亚氨基酸，生成黄色化合物 2、成肽反应 （四） 侧链R基参加的反应 1、Tyr 2、碱性AA 2、碱性AA 3、带硫AA （四）? 侧链R基参加的反应 ——用于蛋白质的化学修饰 1.含-OH基的氨基酸的酯化反应 2. 叠氮反应（又叫pauling反应） （Tyr和His):与叠氮化合物对氨基苯磺酸反应生成棕红色化合物。红色和樱桃红色。 3.Cys的－SH反应：1）.与重金属反应2）.与巯基保护基反应，碘乙酰胺，氯化苄等。3）.在蛋白质中生成胱氨酸。二硫健断裂用过甲酸或巯基乙醇，巯基乙酸。 Tyr酚基在3和5位上易发生亲电取代反应， 如碘化和硝化 黄色反应 Pauly反应 His侧链咪唑基与重氮苯磺酸生成棕红色化合物 Pauly反应 Arg侧链胍基与环己二酮生成缩合物 Trp侧链吲哚基能被 N-溴代琥珀酰亚胺氧化 ——分光光度法测定Trp含量 Met侧链上甲硫基：强亲核基团与烃化试剂成锍盐 保护巯基 与二硫硝基苯甲酸发生硫醇-二硫化物交换 pH8.0时412nm最大光吸收 —分光光度法测定-SH Cys的巯基不稳定，易被氧化成二硫键 巯基在有痕量的金属离子如： Cu2+，Fe2+，Co2+或Mn2+时，易被氧化 Cys中的二硫键可被氧化剂（过甲酸）以及还原剂（巯基化合物）打开。 磺基丙氨酸 五、AA的光学活性和光谱性质 （一）AA的光学活性和立体化学 三、? 氨基酸的构型、旋光性和光吸收 1、?? 氨基酸的构型与旋光性 Gly一种构型,无旋光性 Thr和Ile有四种光学异构体。另Hyp，羟赖氨酸。 其余17种氨基酸有两种光学异构体：L型、D型。 构成蛋白质的氨基酸均属L-型（L-苏氨酸）。 ?★氨基酸的旋光性（符号和大小）取决于它的R基的性质，并与溶液的PH值有关。? 表3-6 蛋白质中L型氨基酸的比旋光度 ★　外消旋物：D-型和L-型的等摩尔混合物。 L-苏氨酸和D-苏氨酸组成消旋物。 L-别一苏氨酸和D-别-苏氨酸组成消旋物 ★内消旋物：分子内消旋 胱