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酵母蔗糖酶的分离提取 姓名：xxx 学号：xxxx 指导老师：xx xx大学 xx学院 10级1班 邮编：xx 摘要：采用自溶法从酵母中提取蔗糖酶，通过乙醇的分级与透析，得到较高纯度的酵母蔗糖酶。并对每次所提取的蛋白质浓度、酶活性、纯化倍数及产量做了相应的计算。最后所得的纯化倍数为14.41倍，产量为59.56%。 关键词： 酵母 蔗糖酶 酶活力 自溶法 产量 前言：生物体内所发生的一切化学反应，几乎都是在专一性酶的催化下进行的，因此酶的研究对了解生命活动的规律以及生命本质的阐述具有十分重要的意义。随着分子生物学的发展，不论对酶分子本身作用机制的研究以及其他研究，越来越需要纯度高的酶制剂。蔗糖酶在畜牧方面，可防治禽兽的疾病，促进幼龄禽兽的发育，节约饲料和提高肉产量等；在农业方面可防治植物病害、刺激植物生长、提高作物产量；在工业上可用作鱼、肉、蔬菜和水果等食品的保鲜剂。NaOH，蒸馏水，PH=4.7缓冲液，DNS试剂，0.9%NaCl，考马斯亮蓝G-250，系列标准蛋白液，150mol/L 磷酸等。 1.2器材 离心机，722分光光度计，水浴锅，量筒25ml，烧杯100ml，大小试管若干，各种专用移液管，吸耳球，玻离棒，胶头滴管，PH试纸等。 1.3方法 1.3.1蔗糖酶粗品制备方法 （1）2）Ｘ１Ｘ１ｒＸｒmL — 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 实际蛋白质含量／ug — 20 40 60 80 100 0.9%生理盐水/mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 — 蛋白质染色液／mL ＯＤ 图1 蛋白质标准曲线 根据上图的蛋白质标准曲线得到公式：y=5.06x (y:OD595值；x:蛋白质含量/mg) （2）蛋白质浓度测定 从留样中取0.3ml加0.9%的NaCl 稀释至3ml（根据实际情况来确定稀释倍数），再按以下表格操作测定 表2 蛋白质浓度OD595值 溶液 对照组 留样 留样’ 系列标准蛋白液/ml — 0.5 0.5 0.9%生理盐水/ml 1.0 0.5 0.5 蛋白质染色液/ml 5.0 5.0 5.0 1.3.3蔗糖酶活性测定 (1) 酶活性测定 取5%的蔗糖、酶液5ml分别于35℃水浴中预热5min[若酶浓度过高，用0.2mol/L的醋酸缓冲液（PH=4.7）适当稀释] 表3　蔗糖酶水解蔗糖 试管 0管 1管 5%蔗糖（mL） 2 2 1mol/L NaOH(mL) 0.5 酶液（mL） 2 2 35℃水浴，3min 1mol/L NaOH(mL) 0.5 表4　还原糖的测定 试管 0管 1管 2管 反应液（mL） 0.5 0.5 0.5 （取自表1中0管） （取自表1中1管） （取自表1中1管） DNS试剂（mL） 3 3 3 水（mL） 1.5 1.5