[理学]抗生素生产工艺3.ppt

1、生物合成法 ① 传统方法； ② “工程菌”制造法； ③ 细胞融合技术法 。 ①传统方法 传统方法目前存在很多不足，因此，人们采用基因工程和细胞融合技术，对抗生素产生菌进行了改造和重新设计，不仅可以制造出许多高效低毒的新型抗生素，还可改革工艺，使抗生素产量成倍地增长。 ② “工程菌”制造法 我国新构建的生产丁胺卡那霉素的“工程菌”，就是把酰化酶基因克隆到卡那霉素产生菌中获得的。新的“工程菌” 生产的新抗生素毒副作用小，对耐卡那霉素、庆大霉素致病菌临床疗效显著。 ③细胞融合技术法 目前DNA重组技术已广泛用于红霉素、链霉素等20多种抗生素的育种工作，可以预见不久将来会有更多的新型抗生素问世。 全化学合成法的优缺点 优点 缺点 许多细菌逐渐出现了耐药性，已经证实某些耐药因子位于细菌内的质粒上，质粒可以在细菌之间转移，结果耐药菌日益增多，抗生素疗效就越来越低。 现在已能使用克隆了酰化酶基因的“工程菌”（大肠杆菌）高效率的生产半合成抗生素。临床现在使用的贵重特效药物先锋霉素（头孢菌素类）、氨苄青霉素，就是这类半合成抗生素类药物。国外已有几十种这类药物在实验室研制成功。 半合成抗生素的目的： 二、生物合成法生产抗生素的工艺过程 1、产生菌种 ★菌种：来源于自然界，得到能产生抗生素的微生物，经分离、选育和纯化后的物质； ★ 保藏：冷冻干燥法制备后，以超低温，即在液氮冰箱(-190℃~-196℃)内保藏； ★ 复壮：一般生产用菌株经多次移植往往会发生变异而退化，故必须经常进行菌种选育和纯化以提高其生产能力。 2、孢子制备 ★条 件：生产用的菌株须经纯化和生产能力的检验，若符合规定，才能用来制备种子； ★ 孢子制备：将保藏的处于休眠状态的孢子，在严格的无菌条件下，将其接种到经灭菌过的固体斜面培养基上，在一定温度下培养5-7日或7日以上，这样培养出来的孢子数量还是有限的； ★ 扩大培养：必要时可进一步用扁瓶在固体培养基(如小米、大米、玉米粒或麸皮)上扩大培养。 3、种子制备 ★目 的：使孢子发芽、繁殖以获得足够数量的菌丝，并接种到发酵罐中； ★ 方 法：可用摇瓶培养后再接入种子罐进逐级扩大培养或直接将孢子接入种子罐逐级放大培养。 ★ 扩大培养：级数通常为二级。 种子扩培工艺流程 4、培养基的配制 ★在抗生素发酵生产中，由于各菌种的生理生化特性不一样，采用的工艺不同，所需的培养基组成亦各异。 ★即使同一菌种，在种子培养阶段和不同发酵时期，其营养要求也不完全一样。 ★培养基主要成分包括碳源、氮源、无机盐类(包括微量元素)和前体等。 (1)碳源 主要用以供给菌种生命活动所需的能量，构成菌体细胞及代谢产物。有的碳源还参与抗生素的生物合成，是培养基中主要组成之一； 常用碳源包括淀粉、葡萄糖和油脂类。 (2)氮源 主要用以构成菌体细胞物质(包括氨基酸、蛋白质、核酸)和含氮代谢物，亦包括用以生物合成含氮抗生素。 有机氮源：黄豆饼粉、花生饼粉、棉籽饼粉、玉米浆、蛋白胨、尿素、酵母粉、鱼粉、蚕蛹粉和菌丝体等。 无机氮源：氨水(氨水既作为氮源，也用以调节pH)，硫酸铵、硝酸盐和磷酸氢二氨等。 (3)无机盐和微量元素 抗生素产生菌和其他微生物一样，在生长、繁殖和产生生物产品的过程中，需要某些无机盐类和微量元素。如硫、磷、镁、铁、钾、钠、锌、铜、钴、锰等，其浓度与菌种的生理活性有一定影响。 (4) 前体(precursor) 定义：在抗生素生物合成中，菌体利用它以构成抗生素分子中的一部分而其本身又没有显著改变的物质。 前体除直接参与抗生素生物合成外，在一定条件下还控制菌体合成抗生素的方向并增加抗生素的产量。 前体的加入量应当适度。 (5)培养基的质量 1）在必要时作摇瓶试验以控制其质量； 2）培养基的储存条件对培养基质量的影响； 3）培养基灭菌过程中温度过高、受热时间过长亦能引起培养基成分的降解或变质； 4）培养基初始pH亦要严格按规程执行。 5、发 酵 ★定 义：利用为生物体的代谢作用，并借助于代谢过程的控制来获得产品的过程。 ★目 的：使微生物大量分泌抗生素。 5、发 酵 ★发酵控制 1）发酵时间：视抗生素品种和发酵工艺而定。 2）溶 氧：在整个发酵过程中，需不断通无菌空气 和搅拌，以维持一定罐压或溶氧。 3）控制灌温：在罐的夹层或蛇管中需通冷却水以维持 一定罐温。 4）消 泡： 加泡沫剂以控制泡