[理学]第13章RNA的代谢药学系.pptVIP

第十三章 RNA的代谢 引物　　　RNA引物　　　　无　　　　　　　　 第一节 依赖DNA的RNA合成 一、RNA是由RNA聚合酶合成的 依赖DNA的RNA聚合酶（DNA dependent RNA polymerase）催化的反应： 1959年，四个实验室从细菌中发现此酶. Mg2＋ (NMP)n + NTP ? (NMP)n+1 + PPi RNA Lengthened RNA 特点： 1.以双链DNA为模板时酶活性最强。 2.以3′→5′方向指导RNA的合成。 3.遵守碱基配对规律。 4.不需要引物。 5.RNA合成以GTP或ATP残基开始。 二、模板链与非模板链 模板链（template strand): 用作RNA合成的模板的链称为模板链，或负链（minus (-) strand）、无意义链（antisense strand）。 非模板链(nontemplate strand ): 与模板链互补的DNA链称为非模板链，或正链（plus (+) strand）、有意义链（sense strand）、编码链（coding strand）。 E. coli RNA polymerase: 1.全酶（holoenzyme): α2ββ′?σ70 2.核心酶（core enzyme): α2ββ′? 3.亚基的作用： α－决定转录的特异性 β－与转录全过程有关（催化） β′－结合DNA模板（开链） σ70－辨认起始点。 4.无3′→5′外切酶活性。 第二节 　　　足迹法与启动子 一、RNA 合成是从启动子开始的 启动子(promoters)： 为DNA转录单位调控序列中RNA聚合酶结合模板DNA的部位。 研究方法： 二、足迹法（footprinting） 足迹法为一种应用DNA序列分析原理建立的技术, 用于证实由某一特殊蛋白结合的DNA顺序（Footprint analysis of the binding site for RNA polymerase on a DNA fragment ）. 足迹法探测蛋白质与DNA结合序列 第三节 RNA合成的终止 一、非依赖Rho因子的转录终止(E.coli) 特征： 终止机制 二、依赖Rho因子的转录终止（E.coli） 特征： 1.终止子在模板上缺少重复腺苷酸序列，但有一段 短序列可转录为发卡结构。 2. ?因子的组成与性质： （1）六聚体，46KD 。 （2）能结合RNA，尤以对poly C的结合力最强。 （3）有ATPase和RNA-DNA解螺旋酶（helicase）的活性。 第四节 真核生物的RNA聚合酶 分类及特点 一、RNA聚合酶Ⅱ需要许多转录因子 　（transcription factors,TF） 二、RNA聚合酶和转录因子在启动子上的组装 三、RNA的合成过程 TF Ⅱ H的一个亚基具有激酶活性，磷酸化Pol Ⅱ C端的数个基团→复合物变构→转录开始→ TF Ⅱ E、 TF Ⅱ H先后释放→延长，TF Ⅱ F继续与Pol Ⅱ 结合→终止→ Pol Ⅱ 脱磷酸化。 四、RNA聚合酶可被选择性抑制 第五节 新生RNA的剪接和修饰 转录初始物（primary transcript): 指新合成的RNA分子。真核生物mRNA及细菌和真核生物tRNA的转录初始物必需进行加工。 断裂基因（split gene)、内含子（introns)与外显子（exons): 真核生物的结构基因的编码区被非编码区所间隔,称为断裂基因。内含子和外显子分别表示相应的非编码和编码序列，外显子还用来代表hnRNA上的编码序列。 一、除去内含子的剪接过程 内含子的发现： 内含子是通过DNA模板与其转录的mRNA的杂交实验发现的。 3.Ⅲ类内含子的剪接：需要剪接体（spliceosome）的作用 （1）剪接体含有小核RNA（ small nuclear RNA，snRNA）： snRNA广泛存在于真核生物的细胞核， 其中U1、U2、U4、U5和U6五种snRNA参与剪接反应。 snRNA与蛋白质形成小核核糖蛋白（small nuclear ribonucleoproteins， snRNPs or snurps ）。 （2）内含子的剪接点：