放射自显影1.ppt

放射自显影 核医学教研室 定义：放射自显影是一种利用放射性核素发射的射线，使乳胶中的卤化银感光而形成潜影，经显影和定影，形成图像。借助感光银颗粒所在的部位和强度，通过影像分析，能准确地判断放射性示踪剂的分布部位和数量（半定量），这种技术称为放射自显影术（autoradiography）。这种技术得到的图像称为放射自显影像（autoradiogram），以上两种术语均可简称为放射自显影（ARG）。 第一节 基本原理 一、潜影的形成和消退 二、类型 三、常用的感光材料 四、常用的放射性核素 五、照相处理 六、放射自显影的分辨力 七、放射自显影的本底、效率 一、潜影的形成和消退 （一）潜影形成的原理 放射自显影原理与光学摄影原理基本相似。乳胶中的每颗溴化银晶体都是由Ag+和Br-的点阵构成。在制作过程中，点阵存在缺陷，这些缺陷即是潜影形成过程中的敏化中心。射线与乳胶相互作用，引起电离作用，使Ag+还原为Ag原子，形成潜影。 潜影形成步骤 1、发射电子：核射线与溴化银作用，使其电离，射出电子，向敏化中心移动形成阴电层。 AgBr+β粒子→Ag++Br-+e- 2、 Ag+的还原：Ag+向敏化中心移动，与e-结合，还原成银原子。 e-+Ag+ →Ag 3、潜影形成：还原的银原子起催化作用，致周围的Ag+被还原，形成潜影。 Ag ……Ag →nAg 潜影经显影液和定影液处理即成为自显影图像。 （二）潜影的消退 有潜影形成的结晶在显影液的作用下，溴被洗去，银原子则留下来成一个黑色颗粒。潜影如未及时显影，则在水、氧等作用下还原的银原子会减少，使潜影消退。故曝光应在干燥、低温、少氧的环境下进行。 二、放射自显影的类型 （一）宏观自显影（macroscopic ARG）：又称大体自显影，观察范围较大，分辨力低，只能供肉眼或放大镜观察，或根据黑度判断示踪剂的分布及相对数量。此种自显影适用于小动物的整体标本，大动物的整个脏器或肢体，以及层析板、免疫沉淀板、骨骼、牙齿的磨片或剖面等的研究。 （二）显微镜自显影（light microscopic ARG）：又称光学显微镜自显影，是借助显微镜进行组织或细胞学观察，分辨能力要求较高。根据银颗粒来判断示踪剂的分布部位和数量的多少。适用于组织切片、细胞涂片等标本的研究。可以对不同细胞进行比较，并根据不同示踪剂在不同时间的分布，研究细胞水平的代谢过程。制备一般采用液体乳胶法。 （三）电子显微镜自显影（electron microscopic ARG)：用于示踪剂在亚细胞结构中分布情况的研究，能显示出普通显微镜观察不到的细微结构与放射性核素分布的关系。适用于细胞超微结构，甚至大分子（DNA 、RNA）上的精确定位和定量，也可观察动态过程。此类技术要求标本在100nm以下的超薄切片，乳胶厚度仅相当银颗粒的直径（约140nm）。 三、常用的感光材料 放射自显影常用的感光材料包括各种类型的原子核乳胶、X线胶片、电影正片、氚片或幻灯片。 （一）原子核乳胶 简称核乳胶，由溴化银和明胶组成。常温上呈半固体，低温为明胶状，温度升至40℃左右为液态。使用时乳胶涂层厚度可由乳胶量和稀释度（用去离子水稀释）进行调节。 液体乳胶直接涂在标本或支持物上，多用于光镜和电镜自显影。将液体核乳胶涂在玻片上，可抽成核乳胶干板（nuclear emulsion plate），再于标本接触形成自显影像，多用于光镜自显影或宏观自显影。也可将干板将乳胶层从玻片上揭下来，称为揭膜核乳胶（stripping film emuslon），多用于定量的光镜自显影。 （二）氚片（tritum film） 由溴化银、碘化银和明胶组成，银晶体颗粒平均直径1μm，对低能β射线敏感度高，对暗室的安全光也有相当耐受。乳胶涂在醋酸纤维素酯片基的单面，乳胶面没有保护层。使用时要注意保护乳胶层面，该面直接与标本接触，以获得最佳灵敏度。主要用于3H标记化合物的宏观自显影或低倍光镜自显影。 （三）X线片（X-ray film） 由溴化银、碘化银和明胶组成，银晶体颗粒直径2.5μm，对射线分辨率较低，对暗室内的安全光有一定的耐受。乳胶涂在醋酸纤维素酯两面，外覆保护层。主要用于核素射线能量较高的宏观自显影或低倍光镜自显影。 四、常用的放射性核素 选择放射性核素应考虑其射线种类、能量和半衰期。 五、照相处理 （一）显影和定影 （二）显影液和定影液 （三）干燥、染色和封固 （一）显影和定影 感光材料与标本接触后，经射线的作用溴化银晶体形成潜影，未受核射线作用的溴化银则不形成潜影。这两种晶体经显影和定影，才能将其区分。显影的作用是使银盐还原，有潜影的结晶比无潜影者显影快，因此适当控制显影时间可只使受照射的结晶呈现黑色颗粒，定影的作