吸光光度分析法01.ppt

化学分析：常量组分(1%), Er : 0.1%～0.2% 依据化学反应, 使用玻璃仪器 仪器分析方法分类 10.1 吸光光度法的基本原理 特点 灵敏度高：测定下限可达10-5～10 -6mol·L-1, 10-4%～10-5% 准确度能够满足微量组分的测定要求： 相对误差2～5％ （1～2％） 操作简便快速 应用广泛 10.2 吸光光度法基本原理 10.3 分光光度计 10.4 显色反应及影响因素 10.5 光度分析法的设计 10.6 吸光光度法的误差 10.7 常用的吸光光度法 10.8 吸光光度法的应用 10.2 吸光光度法基本原理 1 吸收光谱产生的原因 光:一种电磁波,波粒二象性 光的基本性质 (电磁波的波粒二象性) c －真空中光速 2108m/s ~3.0 ×108m/s ?－波长，单位：m,cm,mm,?m,nm,? 1?m=10-6m, 1nm=10-9m, 1?=10-10m ? －频率，单位：赫芝(周)Hz 次/秒 n －折射率，真空中为1 h－普朗克(Planck)常数 6.626×10-34J·s ?－频率 E－光量子具有的能量 单位：J(焦耳)，eV(电子伏特) 1eV=1.602×10－19 J 结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越 长(频率越低)，光量子的能量越低. 单色光：具有相同能量(相同波长)的光. 混合光：具有不同能量(不同波长)的光复合在 一起. 例如白光. 结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越长(频率越低)，光量子的能量越低. 光的互补 吸收光谱曲线：物质在不同波长下吸收光的强度大小 A～l关系 最大吸收波长 lmax：光吸收最大处的波长 4、吸收光谱（吸收曲线)的获得 4. 定性分析与定量分析的基础 5.溶液的吸光定律 朗伯-比尔定律 当一束平行单色光通过均匀、透明的吸光介质时，其吸光度与吸光质点的浓度和吸收层厚度的乘积成正比. (2) 吸光度与透光率 (3) 吸光度与光程的关系 A = abc (4) 吸光度与浓度的关系 A = abc (4) 吸光系数 Absorptivity A=0.001= ? bc bc = 0.001/? (5) 朗伯-比尔定律的适用条件 1. 单色光 应选用?max处或肩峰处测定. (6) 吸光度的加和性与吸光度的测量 分光光度计的组成 吸光光度法仪器主要差异比较 (4) 单波长单光束分光光度计 (5)单波长双光束分光光度计 10.4.1 显色剂与显色反应 有机显色剂 a. 选择性好 b. 灵敏度高 (ε104) c. 产物的化学组成稳定 d. 化学性质稳定 e. 反应和产物有明显的颜色差别 (?l60nm) 显色反应的选择 灵敏度高，一般ε10 4; 选择性好; 显色剂在测定波长处无明显吸收, 对照性好, ? ?max 60 nm; 反应生成的有色化合物组成恒定，稳定; 显色条件易于控制，重现性好. 10.4.2 显色条件的确定 2. 显色反应酸度（c(M)、 c(R)一定） 10.4.3 测定中的干扰以及消除方法 2. 物理法—选择适当的测定波长 --选择适当的参比溶液 干扰组分与显色剂有反应,又无法掩蔽消除时： 1）掩蔽被测组分，再加入显色剂，作参比. 2）加入等量干扰组分到空白溶液中,作参比. 10.5 吸光光度法的应用 10.5.1 单一组分的测定 3. 蛋白质测定—溴甲酚绿、考马司亮蓝等 4. 氨基酸测定—茚三酮(紫色化合物) 5. 水质检测: NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+---- 6. 药物含量测定—比吸光系数定量；荷移光谱法测定. 7. 紫外吸收(UV): NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白质等。 离子缔合反应 成盐反应 罗丹明B 褪色反应 Zr(IV)-偶氮胂III络合物测定草酸 吸附显色反应 达旦黄测定Mg(II),Mg(OH)2吸附达旦黄呈红色 3 显色剂 无机显色剂: 过氧化氢，硫氰酸铵，碘化钾 有机显色剂： 偶氮类：偶氮胂III 4 多元络合物 混配化合物