植物细胞和组织培养教材教学课件.ppt

;;1665年 Hooke 发现细胞 1838年Schleiden和Schwann : “一切植物，如果它们不是单细胞的话，都完全是由细胞集合而成的，细胞是植物构造的基本单位。” 1900年孟德尔定律的重新发现使人们认识到, 染色体是遗传因子的载体。细胞具有同样数目的染色体，每个细胞自然就携带了彼此相同的全部遗传因子，因此也应当像受精卵一样，具备分化和发育的潜能。 1902年Haberlandt发表了著名论文《植物细胞离体培养实验》,指出: 作为高等植物的器官和组织基本单位的细胞有可能在离体培养条件下实现分裂分化，乃至形成胚胎和植株。这种见解后来被称为细胞全能性学说（cell totipotency） ;1951年 Skoog 和 Tsui（崔澂）采用加有IAA和腺嘌呤的培养 基, 使烟草茎段的髓组织的细胞分裂和生长，并且分化形 成不定芽。这是人类第一次从离体培养的植物组织诱导出 芽和植株。 1955年Miller 等从DNA的降解产物中分离???6-呋喃氨基嘌呤 ，发现它不仅可以代替腺嘌呤诱导烟草茎段分化芽，而且诱 导芽分化的效力比腺嘌呤高三万倍，为诱导离体细胞的器官 分化提供了有效的方法。 1958年Steward导单个来自胡萝卜根的悬浮细胞发育为成熟的 胚胎，完全证明了Haberlandt提出的细胞全能性学说。至今已 经在一千多种植物上，从各种类型的组织和细胞，甚至原生 质体，诱导出胚胎和完整植株，因此植物细胞的全能性的存 在已是不争的事实。 ;;植物细胞全能性及其表达; ; 一、合子和早期胚胎细胞 精卵结合产生的合子合子是真正意义上的胚性细胞。许多植 物的早期胚胎细胞可以通过裂生多胚（cleavage polyembryony） 方式产生两个以上的胚，说明它们是一群胚性细胞或者胚胎干细 胞。裂生多胚现象普遍存在于裸子植物中，例如松属（Pinus)。 被子植物中裂生多胚现象比较少见。在美洲鹿百合（Erythronium americanum）植物中曾观察到裂生多胚，它们是从原胚顶部的细 胞增生形成的。;4. 花粉细胞 ; （三）从分化细胞到胚性细胞 在离体培养的条件下，一个分化的细胞转变为分生状态成胚性细胞团或愈伤组织的现象称做脱分化（dedifferentiation）。一个巳分化细胞若要表现其全能性，形成完整植株，首先要经历脱分化过程，然后经历再分化(redifferentiation)过程。在大多数情况下，再分化过程是在愈伤组织细胞中发生的，但在有些情况下，再分化可以直接发生于脱分化的细胞中，无须经历愈伤组织阶段。组织培养研究的结果已经揭示，分化细胞的脱分化需要两个条件：创伤或/和外源激素。 ;; ; 1970-71年Hartwell利用酵母的细胞周期行为异常的突变体，成功地分离了100多个与参与细胞周期调控的基因，即所谓CDC（cell division cycle）基因。这些基因中的一个被称为CDC28，它能够控制细胞周期的第一阶段G1期进行。70年代中期，在裂褶酿酒酵母中发现了CDC2基因。他证明CDC2基因G2期和分裂期的进行起调控作用。1987年Hunt发现了一类识别蛋白,叫做细胞周期蛋白（cyclin），已经发现的有10余种。Cyclin在每次细胞周期中周期性的形成和降解。与此同时Nurse又在人类细胞中发现了一个编码细胞周期蛋白依赖性激酶CDK（cyclin dependent kinase）的基因CDK1。某种特定的cyclin与CDK分子结合，能够引导CDK使一种特定的与细胞分裂相关的靶蛋白磷酸化，保证细胞分裂正常运转。已经知道细胞中CDK和cyclin含量的提高与癌细胞的分裂有关，推测CDC、CDK基因和cyclin基因的话化与表达也与植物分化细胞脱分化第一次分裂的启动有关。 ; 最近Boucheron 等（2002）将一种细胞周期基因CDC2a的启动子与GUS连接，构建质粒转化烟草，利用GUS染色反应研究转基因烟草髓组织培养物中CDC2a的表达，发现它只在启动有丝分裂的细胞中表达，说明CDC基因家族参与调控成熟细胞的脱分化过程。然而对于调控脱分化过程的基因现在还了解得很少，有待开展系统的研究。揭示启动脱分化过程的相关基因及其表达将有助于了解克隆的机理和癌症的起因，是生命科学的前沿领域。; 二、脱分化过程中细胞结构的变化 植物体内最大量的分化细胞是成熟的薄壁细胞，例如叶肉 细胞、表皮细胞、内皮层和髓部的薄壁细胞等，它们的细胞核 的体积较小，位于细胞边缘，细胞中央有一个大的液泡，细胞 质内核糖体密度较低，多聚核糖体数目很少，质体为分化程度 较高的叶绿体、杂色体、白色体或淀粉体。