09第九章 其它标记免疫分析技术PPT.ppt

三、 斑点金免疫层析试验 （一）原理 （二）试验方法 （一）原理 斑点免疫层析试验 （dotimmunochromatographic assay，DICA） 简称免疫层析试验（ICA），也以硝酸纤维素膜为载体，但利用了微孔膜的毛细血管作用，滴加在膜一端的液体慢慢向另一端渗移，如同层析。 （二）试验方法  免疫层析试验以单克隆双抗体夹心法为例。 四、 临床应用及评价 免疫胶体金技术的发展前景自免疫胶体金层析技术作为诊断试剂广泛应用到临床后，由于它的快速简便、准确，具有高度特异性和高敏感性，结果直观可靠，而且试剂和样品用量极少，每个样品只需1～2μl,无需仪器设备，简化了烦琐的常规操作过程，同时也减小了因操作引起的误差，是一种目前发展最快的复合型免疫层析技术。在临床医学检验广泛应用，新项目正在不断发展中。 小 结 胶体金免疫技术是以胶体金作为标记物的免疫标记技术，本章主要介绍了斑点金渗滤试验和斑点金免疫层析试验。斑点金免疫渗滤试验是在将硝酸纤维素膜包被了抗原或抗体，将其置于渗滤装置中，进行免疫结合试验，斑点金免疫层析试验是以硝酸纤维素膜为载体将胶体金标记技术和蛋白质层析技术相结合免疫分析技术。 金免疫技术简便、快捷，应用广泛，适合“床边检验”。 返回章目录 放射免疫技术 酶免疫技术 发光免疫技术 三大经典标记技术 第三节 发光免疫分析技术 发光:是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态（较低能级）跃迁到激发态（较高能级），然后再返回到基态，并释放光子的过程。 根据形成激发态分子的能量来源不同可分为: 光照发光、生物发光、化学发光等。 一、概述 光照发光（photoluminescence）：发光剂经短波长入射光照射后进入激发态，当回复至基态时发出较长波长的可见光。 光照发光 生物发光（bioluminescence） ：是反应底物在荧光素酶的催化下利用ATP产能，生成激发态的氧化荧光素，后者在恢复到基态时多余的能量以光子形式放出。典型例子为萤火虫发光。 生物发光 化学发光（chemiluminescence）：在常温下由化学反应产生的光的发射。 化学发光是一个多步骤的过程，其机制为某些化合物（发光剂或发光底物）可以利用一个化学反应产生的能量使其产物分子或反应中间态分子上升至电子激态。当此产物分子或中间态分子衰退至基态时，以发射光子的形式释放能量（即发光）。 化学发光 一些化学反应能释放足够的能量把参加反应的物质激发到能发射光的电子激发态。 反应过程可简单地描述如下： A十B C* C* C＋ h·γ 其中γ为光子，C*表示C处于单线激发态 （一）直接化学发光 若激发能传递到另一个未参加化学反应的分子D上，使D分子激发到电子激发态，D分子从激发态回到基态时发光。 反应过程可表示如下： A十B C* C*十D C十D* D* D十h·γ （二）间接化学发光 该反应必须提供足够的激发能, 并由某一步骤单独提供, 因为前一步反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发光; 要有有利的反应过程, 使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态; 激发态分子必须具有一定的化学发光量子效率释放出光子, 或者能够转移它的能量给另一个分子使之进入激发态并释放出光子。 （三）化学发光条件 化学发光强度（ICL）取决于化学反应的速率（dc/dt）和反应的化学发光量子效率（ ΦCL ） ICL= ΦCLdc/dt ΦCL=ΦrΦf Φr:生成激发态产物的量子产率，也就是每一个参加反应的分子产生的激发态； Φf :激发态产物分子的发光量子产率，也就是每一个激发态产生的光子数，对于一定的化学发光反应，为一定值。 （四）化学发光强度 在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物称为化学发光剂或发光底物。 化学发光剂 发光的量子产率高； 物理-化学特性要与被标记或测定的物质相匹配； 能与抗原或抗体形成稳定的偶联结合物； 其化学发光常是氧化反应的结果； 在所使用的浓度范围内对生物体没有毒性。 作为化学发光剂的条件 在发光免疫分析过程中不需酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在化学结构上有产生发光的特有基团，可直接标记抗原或抗体。 （一）直接化